【摘 要】
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目的研究MicroRNA-29a-3p(miR-29a-3p)在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,并阐明其发挥作用的信号转导机制。方法首先,为了调查miR-29a-3p在肝细胞癌发生发展中的功能,利用实
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目的研究MicroRNA-29a-3p(miR-29a-3p)在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用,并阐明其发挥作用的信号转导机制。方法首先,为了调查miR-29a-3p在肝细胞癌发生发展中的功能,利用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(q RT-PCR)分析技术对收集的21例由慢性酒精滥用导致肝细胞癌和18例正常肝脏组织样品中的miR-29a-3p表达水平进行了检测。其次,为了阐明miR-29a-3p在肝细胞癌发生发展中的可能机制,通过靶基因预测软件(Target Scan)发现miR-29a-3p与PTEN基因存在结合位点,为了确定miR-29a-3p与PTEN基因之间是否存在作用关系,利用q RT-PCR分析技术测定了肝细胞癌组织和正常肝脏组织中PTEN的m RNA表达水平;构建慢病毒转染肝癌细胞模型并设立空白对照组,用q RT-PCR技术和Western Blot法检测空白对照组和转染miR-29a-3p抑制剂组的PTEN m RNA及蛋白的表达水平;利用双荧光素酶报告分析系统测定BC组、miR-con组、miR-29a-3p组和miR-29a-3p抑制剂组的NF-κB的活性。最后,为了进一步明确miR-29a-3p对肝癌细胞体外增殖的影响,用MTT法测定了BC组、转染miR-29a-3p组、转染miR-29a-3p抑制剂组的细胞增殖活性,并用q RT-PCR技术和Western Blot分析检测了BC组和miR-29a-3p抑制剂组中VEGF和MMP-9的表达水平的变化。结果1与正常肝脏组织相比,miR-29a-3p在因慢性酒精滥用导致的肝细胞癌中的表达水平下调(P?0.05);2 PTEN m RNA在肝细胞癌组织中的表达水平显著高于正常肝脏组织中的表达水平(P?0.05),此外在转染miR-29a-3p抑制剂抑制了人类BEL-7402肝癌细胞中的miR-29a-3p后,与空白对照组(BC)相比,PTEN的m RNA和蛋白均表达上调(P?0.05);3 Western Blot分析发现miR-29a-3p抑制剂降低了p65的磷酸化水平(P?0.05),双荧光素酶报告基因测定结果表明miR-29a-3p能够增加NF-κB信号转导通路因子的活性、miR-29a-3p抑制剂能够抑制NF-κB的活性(P?0.05);4 MTT法测定细胞增殖活性表明,转染miR-29a-3p模拟物后细胞生长速度有效减低(P?0.05),然而在加入miR-29a-3p抑制剂后,肝癌细胞系BEL-7402细胞生长速率显著提高(P?0.05);同时与空白对照组相比,miR-29a-3p抑制剂能够使VEGF和MMP-9的m RNA和蛋白表达水平显著增加(P?0.05)。结论1在因慢性酒精滥用导致的肝细胞癌中miR-29a-3p表达水平下调。2 miR-29a-3p表达水平下调能够增加PTEN基因表达,抑制NF-κB信号转导通路活性。3miR-29a-3p表达上调对BEL-7402肝癌细胞系体外增殖具有抑制作用。图8幅;表2个;参200篇。
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