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干扰素调节因子9(IRF9)是JAK-STAT信号传导中的一个重要转录调控蛋白。本次研究首先克隆了青鱼(black carp)的IRF9基因的编码序列(coding sequence,CDS),同时对它的抗病毒功能进行了初步地探究。bcIRF9基因的CDS序列由1287个脱氧核苷酸组成,可以翻译成428个氨基酸;通过ExPASy软件预测到bcIRF9的分子量和等电点分别为48.31 kDa和7.98。其次结构预测了解到bcIRF9在结构进化中保守,主要由N端的DNA结合结构域(位于1-120aa,DBD)、C端的IRF相关结构域(位于216-428aa,IAD)和中间的连接结构域(位于121-215aa,LD)构成。实时定量PCR实验得到:bcIRF9在宿主的肾细胞中转录成mRNA的数量会随着LPS,poly(I:C)和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的刺激而提高。免疫印迹实验表明:在HEK293T细胞和EPC细胞中,构建的bcIRF9真核表达载体能成功表达,而且其条带大小约为54KDa。免疫荧光实验显示:bcIRF9集中位于细胞核。我们通过构建bcIRF9的结构域缺失突变体来探究不同结构域对其定位和功能的影响,结果首先发现它的接头结构域(LD)可以影响它的定位。双荧光素酶报告基因实验发现:bcIRF9可呈剂量依赖性地上调干扰素刺激反应元件(ISRE)启动子,其次它的DBD和LD对其上调ISRE启动子是必不可少的。本课题组已报道了青鱼STAT1的两种亚型(bcSTAT1a和bcSTAT1b)能在宿主抗病毒免疫中发挥重要功效。但在硬骨鱼中,对于STAT1和IRF9之间的作用了解还甚少。双荧光实验发现:在EPC细胞中将bcIRF9和bcSTAT1a或者bc STAT1b共同过表达时,bcSTAT1a可以增强bcIRF9诱导ISRE产生的能力,但是bcSTAT1b却相反。细胞攻毒实验中发现:在EPC细胞中过表达bcIRF9后,会增强它的抗GCRV病毒能力;其次当bcSTAT1a与bcIRF9共同表达在EPC细胞中时,EPC的抗病毒能力会比bcIRF9单独作用更加显著,但是bcSTAT1b的加入会出现相反的效果。总之,本论文表明了bcIRF9在抗病毒免疫中发挥着重要作用,并在硬骨鱼类中首次证明了,在抗GCRV病毒的先天免疫应答期间,青鱼STAT1的俩个同源蛋白STAT1a/1b对IRF9介导的信号转导中起不同的调控作用。