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研究背景血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和凋亡是动脉粥样硬化发生、发展的重要原因。当血管局部受到损伤后可发生一种修复反应,是由多种细胞因子和生长因子所介导的局部血管重建和重构,主要包括血管平滑肌细胞的增殖和凋亡,细胞外基质的分泌和堆积及内膜增生。这对于动脉粥样硬化性疾病具有重要意义。而近年来的研究发现长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lnc RNAs)及微小RNAs(micro RNAs,mi RNAs)均对VSMCs的增殖及凋亡具有重要的调控作用,故对lnc RNAs及mi RNAs与VSMCs关系的研究也成为了目前的热点。目前发现的lnc RNAs与mi RNAs数量庞大,作用机制丰富。其中的研究重点之一是竞争性内源性RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA)假说。这一发现被用于解释RNA语言在调节RNA串扰及控制生物学功能中的作用。目前已经确定mi RNAs可以通过与目标m RNAs结合而导致m RNAs基因沉默。而lnc RNAs可以作为一种ce RNA,与mi RNAs产生相互作用,共同参与目标m RNAs的表达调控。Lnc RNAs(ce RNAs)能够通过应答元件与mi RNAs结合,从而影响mi RNAs导致的基因沉默。近期有研究提示lncRNA人母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)可能与VSMCs的增殖及凋亡过程存在关联,而针对其在VSMCs的增殖及凋亡过程中的可能机制,是本课题所关住的重点。因此,我们通过生物信息分析,选定MEG3,其可能通过特异性结合mi RNA-361-5p调节ATP结合盒蛋白A1(ATP-binding cassette protein A1,ABCA1的表达,共同参与VSMCs的增殖及凋亡。研究目的:通过建立细胞模型,探讨MEG3及mi R-361-5p与VSMCs的增殖及凋亡之间的关系及其相互作用机制。观察ACS患者外周血MEG3与mi R-361-5p的表达水平,以及不同冠脉病变形态及冠脉内介入治疗与RNAs表达变化量之间的关系。方法及结果:方法:以氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)处理VSMCs建立模型,通过实时定量荧光PCR(Real-Time Transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测MEG3、mi R-361-5p、ABCA1等RNAs在该模型中的表达,以免疫印迹试验(western blot)检测ABCA1表达。使用CCK-8增殖试验及流式细胞术分别检测VSMCs的增殖及凋亡。通过敲除及过表达系统进一步确定以上因素在VSMCs增殖及凋亡过程中的分子机制。通过荧光酶素报告及生物信息学分析确定MEG3、mi R-361-5p及ABCA1之间的靶定关系。连续入选2018年8月至2018年10月于我院住院治疗的临床资料完整的具有胸痛症状的患者数据。根据患者临床症状、心电图改变、心肌损伤标志物变化情况及冠状动脉造影结果,将患者分为非冠心病组、稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组及心肌梗死组。除给予标准心内科规范治疗外,根据冠脉造影结果及患者意愿,为患者行经皮冠状动脉介入治疗。通过RT-PCR方法检测患者冠脉造影或介入治疗前后MEG3、mi R-361-5p及ABCA1的表达。比较不同组患者间三种RNAs的表达差异。同时分析冠状动脉病变形态与RNAs表达水平的关联。并进一步研究冠脉靶病变的复杂程度及支架植入情况与RNAs表达变化量之间的联系。结果:在ox-LDL诱导损伤的VSMCs模型中MEG3表达水平下调,并与mi R-361-5p的表达存在关联。抑制MEG3可促进VSMCs的增殖并抑制细胞凋亡。此外,MEG3可以作为mi R-361-5p的ce RNA,通过影响ABCA1的表达调控VSMCs的增殖及凋亡。心肌梗死患者中mi R-361-5p表达水平较其他组患者上调,不稳定心绞痛组ABCA1表达水平低于其他组患者,lnc RNA MEG3在各组患者间表达无明显差异。在冠状动脉具有侧支循环的患者中,lnc RNA MEG3表达水平下降,而mi R-361-5p表达升高,但未显示其与冠脉病变的严重程度存在关联。PCI术后患者mi R-361-5p表达水平较术前上调,ABCA1表达水平下降,lnc RNA MEG3无明显改变。三种RNAs表达量变化未显示出与靶病变复杂程度存在关联。而mi R-361-5p表达变化与支架长度呈正相关,ABCA1表达变化量与支架长度呈负相关。结论:1、MEG3可以作为mi R-361-5p的ce RNA,通过影响ABCA1的表达调控VSMCs的增殖及凋亡。2、心肌梗死患者中mi R-361-5p表达水平较其他组患者上调,不稳定心绞痛组ABCA1表达水平低于其他组患者。3、MEG3与mi R-361-5p可能与冠脉侧支循环的建立存在关联。4、mi R-361-5p与ABCA1可能参与了PCI术后的血管重塑过程。