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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引发的结核病是世界上除艾滋病毒以外的单一病原体导致的致死率最高的疾病。近年来随着医药技术的迅速发展,结核病的诊断和治疗也取得了一些成效,但由于耐药结核病、多耐药结核病、广泛耐药结核病及结核病与艾滋病共感染的出现,使得结核病的诊治难上加难,许多抗结核药物不再对结核病的治疗发挥作用,因而新的治疗策略和药物开发迫在眉睫。MTB可以破坏巨噬细胞的抗微生物途径,避免溶酶体的吞噬,且需要ESX特异性蛋白分泌系统介导毒力的产生,从而引起细胞天然免疫应答。ESX-1分泌系统存在于多种放线菌中,能够分泌早期抗原靶标esat-6和cfp-10蛋白,这两个蛋白是MTB重要的毒力因子。而MTB基因组可编码5个潜在的VII型分泌系统基因簇,它们有相似的基因序列,却发挥着不同的功能。VII型分泌系统在MTB宿主-病原体互作过程中发挥重要功能,这可能为MTB的预防、诊断和治疗提供更好的研究策略。而早期抗原靶标esat-6则是作为早期诊断策略开发的重要抗原靶标。Esat-6(早期分泌抗原靶6:early secretary antigen target 6)是MTB的一个小分子的分泌蛋白,在MTB的毒力和保护性免疫中非常重要。Esat-6是MTB感染早期介导细胞免疫应答的主要的优势抗原,动物或人感染MTB可以产生有免疫活性的T淋巴细胞识别esat-6抗原,并可以产生高水平的IFN-γ。Esat-6蛋白属于esat-6家族,该家族蛋白约100个氨基酸残基,在免疫应答,尤其是早期免疫应答中发挥至关重要的作用。此外,该家族蛋白在MTB中约有23个成员(Esx A-W),除了EsxQ,其它基因均成对存在,其中一些高度相似,而其它的则保守性很低,有一个序列类似的WXG(Trp-Xaa-Gly)基序,大多数功能未知。本研究中选取Esx E(Rv3904c),其中一个esat-6/WXG100家族的蛋白,研究Esx E在压力和免疫应答中的功能。我们从H37Rv基因组上体外扩增Rv3904c的基因片段,构建重组菌株Ms-Rv3904c。7H9液体培养基培养重组耻垢分枝杆菌Ms-Rv3904c,加乙酰胺诱导Western blotting检测Esx E蛋白的表达;以空载菌株Ms-Vec对照,分别检测重组菌株在诱导条件下的生长情况,生物膜形成差异;对抗生素诺氟沙星(Norfloxacin)、异烟肼(Isoniazid)、万古霉素(Vancomycin)和氧氟沙星(Ofloxacin)及表面活性物质SDS的耐受情况;重组菌侵染巨噬细胞后的存活能力,并用qRT-PCR法检测了侵染后巨噬细胞的细胞因子的变化,进一步了解重组菌在胞内免疫应答反应。综上,本文中对esat-6家族蛋白EsxE进行初步探索,结果发现Esx E蛋白在分枝杆菌中是保守的,对表面活性物质SDS表现出很强的耐受性;而对抗结核药物对诺氟沙星和异烟肼表现出不同程度的敏感性,特别是对诺氟沙星极其敏感。侵染染巨噬细胞后,EsxE蛋白的过表达可增强重组菌在巨噬细胞中的存活,并在早期免疫应答中增强IL-1β,IL-18和IL-10等细胞因子的表达,这一研究结果有助于更好的理解esat-6家族蛋白。