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目的本次研究探讨利拉鲁肽(Liraglutide,LIRA)对牙周炎潜在的治疗作用。选用经典革兰阴性菌E.Coli的LPS和人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,hPDLCs)共培养来模拟牙周炎的病理过程,体外分析LIRA对LPS作用下hPDLCs增殖、迁移、炎症以及成骨分化潜能的影响。方法采用组织块酶消化法原代培养hPDLCs,免疫组织化学染色法鉴定细胞来源;茜素红染色分析原代培养获得的细胞是否拥有骨向分化潜能;q RT-PCR鉴定hPDLCs是否表达胰高血糖素样肽-1受体(Glucagon-like peptide,GLP-1 receptor,GLP-1R);MTT法筛选LIRA和E.Coli LPS最佳作用浓度和时间并分析LIRA对LPS刺激下hPDLCs增殖活性的影响;划痕试验分析LIRA对hPDLCs迁移能力的影响;qRT-PCR和Western Blot分析LIRA对LPS刺激下hPDLCs炎症因子表达(IL-6和TNF-α)以及成骨因子表达(ALP和Runx2)的影响。结果1.组织块酶消化法成功培养获得hPDLCs,经免疫组化染色鉴定:抗波形丝蛋白阳性、抗角形蛋白阴性,证明细胞来源于间充质,茜素红染色证实了hPDLCs的成骨分化能力。2.qRT-PCR结果显示hPDLCs上存在GLP-1R mRNA的表达,并且LIRA可增加GLP-1R mRNA的表达。3.MTT结果:25,50,75,100,125 nM LIRA培养24h后,均可增强hPDLCs的增殖活性(P<0.05),并呈剂量依赖性;认为100 nM为LIRA的最佳药物浓度。低浓度LPS(0.1,1,10μg/ml)可促进hPDLCs的增殖活性,而高浓度LPS(100μg/ml)则抑制hPDLCs的增殖活性(P<0.05),呈时间依赖性;因此,选择10μg/ml LPS与hPDLCs共培养来模拟牙周炎的发病过程。再者,LIRA可减弱高浓度LPS对hPDLCs增殖活性的抑制作用(P<0.05)。4.划痕试验结果:LIRA可促进hPDLCs的迁移能力,呈时间依赖性。5.qRT-PCR结果:炎症因子,与对照组相比,LPS组显著增加IL-6和TNF-αmRNA的表达(P<0.01),LIRA组则可抑制IL-6和TNF-αmRNA的表达(P<0.05);而与LPS组相比,LPS+LIRA组显著降低IL-6和TNF-αmRNA的表达(P<0.01)。成骨因子,与对照组相比,LIRA组和LPS组均可增加ALP和Runx2mRNA的表达(P<0.05);而与LPS组相比,LPS+LIRA组则抑制ALP和Runx2mRNA的表达(P<0.05)。6.Western Blot结果:炎症因子表达结果与qRT-PCR结果基本一致;成骨因子表达结果则与qRT-PCR结果略有差异:与对照组相比,LIRA明显促进ALP和Runx2蛋白的表达(P<0.05),而LPS组则可抑制ALP和Runx2蛋白的表达(P<0.05);而与LPS组相比,LPS+LIRA组则明显增加ALP和Runx2蛋白的表达(P<0.05)。结论1.hPDLCs上存在GLP-1R的表达,LIRA可促进GLP-1R的表达,并促进hPDLCs的增殖活性和迁移能力;2.LPS可诱导hPDLCs炎症反应,而抑制hPDLCs成骨分化,即LPS与hPDLCs共培养可以模拟牙周炎的病理过程;3.LIRA不仅可以抑制hPDLCs的炎症反应,促进hPDLCs的骨向分化潜能,更能抑制LPS诱导的炎症反应,恢复LPS对hPDLCs骨向分化潜能的损害。这就表明LIRA对牙周炎有潜在的治疗作用,为LIRA作为牙周炎的辅助用药提供了一定的理论依据。