洋虫超氧化物歧化酶提取、纯化及部分酶学性质研究

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超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,EC.1.15.1.1,简称SOD),是广泛存在于生物体的一种金属酶,能催化活性氧自由基发生歧化反应。在抗肿瘤、抗辐射、抗炎症等方面也发挥着巨大作用。洋虫(Martianus dermestoides Chevrolat)体内含有丰富的营养物质,包括多种人体必需氨基酸、维生素、微量元素和不饱和脂肪酸等,具有较高的开发价值。本文以洋虫成虫为原料,主要研究了洋虫成虫体内超氧化物歧化酶的提取、纯化及部分酶学性质。本文首先研究了不同的抽提液种类、浓度、固液比、抽提温度及抽提时间5个因素,并运用单因素结合正交实验设计对洋虫超氧化物歧化酶的提取工艺进行了研究,得到最优的提取条件为:固液比1:13的0.13M NaCl溶液在28℃下抽提14h。在此条件下提取洋虫SOD其活性可达38.83U/ml,比活可达123.66U/mg pro。研究结果还表明,用NaCl溶液比传统的磷酸盐缓冲液抽提效果更好,其中抽提浓度对SOD的提取结果影响最大;同时得到SOD的最佳热变性温度为60℃,时间为15min。通过透析,Sephadex G-75凝胶过滤和DEAE Sepharose FF离子交换层析等纯化技术对洋虫体内SOD进行了进一步纯化。由SDS-PAGE电泳图片计算得出纯酶的分子量为40.58KDa。通过抑制性实验发现H2O2对SOD活力有强烈的抑制,而CHCl3-CH3CH2OH对其基本无抑制作用,表明洋虫SOD的类型可能为Cu/Zn-SOD。对SOD部分酶学性质的研究表明,提纯后的SOD最适温度为50℃,具有较强的热稳定性,最适pH为6.0,在pH为5-8范围内,洋虫SOD的稳定性较好。
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