研究背景阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种起病隐袭的进行性发展的痴呆，是最常见的痴呆类型，约占老年期痴呆的2/3。AD的发病机制与遗传因素有关，主要涉及到细胞凋亡、细胞分化、细胞周期等。目前普遍认为，发病关键环节之一是β淀粉样蛋白在脑部神经元的异常积聚，形成“老年斑块”和“神经元纤维缠结”。近年研究与大脑相关的基因很多,认为利用分子生物学技术，分析基因结构变异和表达状态，从而对疾病在表型改变以前进行早期诊断。分拣蛋白相关受体L1基因（sortilin-related receptor1gene，SORL1）是与阿尔茨海默病的患病风险有关联的新发基因之一，在神经细胞内表达，作为分选蛋白受体穿梭于胞膜、胞质和高尔基体，参与神经细胞的物质转运和交换过程。目前欧美等国家通过该基因序列中的单核甘酸多态性进行对照研究，但SORL1基因在外周血中的表达研究较少，尤其是其突变及异常甲基化与晚发型阿尔茨海默病的相关性研究甚少。本课题组的前期研究证明，SORL1基因mRNA水平在散发性阿尔茨海默病（SporadicAlzheimer’s disease，SAD）患者以及正常人中存在显著差异。在本次研究中，本课题组通过对SAD患者和健康老年人外周血SORL1基因蛋白编码区（CDS）区进行基因测序分析，发现其常见基因突变位点，并进一步分析SORL1基因突变与其mRNA水平的相关性；同时我们采用硫化测序方式（BS-PCR）以及甲基化特异性PCR（MS-PCR）技术，初步了解SORL1启动子区甲基化状态，为疾病的早期监测提供可能的分子理论依据。第一部分SORL1基因突变和mRNA水平与阿尔茨海默病的相关性研究目的研究散发型阿尔茨海默病患者（SAD）SORL1基因突变与mRNA水平的相关性方法随机选择SAD患者55例（SAD组），另选健康体检者15例（对照组），分别取两组外周血行单个核细胞分离，提取总RNA，反转录合成cDNA，再以cDNA为模板，通过PCR扩增，进行定量PCR检测，最后利用ABI公司分析软件进行定量分析。通过对SORL1基因mRNA水平检测以及全长cDNA测序分析，并将基因突变与未突变SORL1基因mRNA进行水平相关性分析。结果SAD组中有8例出现不同位点的SORL1基因突变，其发生概率为14.5%，较为常见的突变位点为2650以及2850碱基序列，而对照组未检测到SORL1基因突变；SAD组SORL1基因mRNA表达水平较对照组明显减低； SAD组中SORL1基因突变组与未突变组mRNA水平差异无统计学意义（P=0.152）。结论SORL1基因突变参与SAD的发生； SORL1基因突变与SORL1基因mRNA水平无明显相关性。第二部分SORL1基因异常甲基化与阿尔茨海默病关系的研究目的研究SORL1基因启动子区异常甲基化与散发型阿尔茨海默病（SAD）发生的相关性。方法选择散发性阿尔茨海默病（SAD）患者40例为SAD组，另选择健康体检者10例为对照组。提取外周血DNA，设计硫化测序PCR（BS-PCR）引物以及甲基化特异性PCR（MS-PCR）引物，进行PCR扩增以及测序分析。结果3例健康标本以及3例SAD患者标本DNA经硫化且BSP测序分析，其健康标本甲基化率分别为1.5%、1.0%、1.0%，SAD患者SORL1甲基化率分别为74.0%、70.5%、73.0%；MSP分析结果显示：SORL1基因在10例健康人中呈完全非甲基化状态，在40例SAD患者中其甲基化阳性率为52.5%（p<0.05）。结论SORL1基因启动子区异常甲基化可能参与SAD的发生，