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本课题基于环糊精及其衍生物可以增强蛋白质药物的稳定性,还可以作为蛋白质药物的口服吸收促进剂和渗透增强剂,因而利用环糊精和壳聚糖生物可降解材料构建新型口服疫苗传递系统。选用卵清蛋白(OVA)为模型蛋白质药物,β-环糊精(β-CD)及其衍生物羧甲基-羟丙基-β-环糊精(CM-HP-β-CD)为主体分子,利用磁力搅拌-冷冻干燥法制备OVA-β-CD和OVA-CM-HP-β-CD包合物,再将其载入壳聚糖(CS)微球中,研究该载药体系在小鼠体内的免疫应答情况,为构建新型口服疫苗传递系统奠定基础。合成β-CD二取代衍生物CM-HP-β-CD。采用核磁确定CM-HP-β-CD中羧甲基的取代度DSCM = 5.7,羟丙基的取代度DSHP=2.9。制备OVA-β-CD及OVA-CM-HP-β-CD两种包合物,测定其表观包合常数Kc分别为 3.5×103 M-1 和 2.1×104 M-1。采用等摩尔系列法测定 OVA-β-CD 和 OVA-CM-HP-β-CD形成的最佳包合比均为10:1。采用扫描电镜(SEM)和热重分析(TGA)对包合物的结构进行表征。TGA结果表明,OVA-β-CD的热解温度比OVA提高29.5℃,OVA-CM-HP-β-CD的热解温度比OVA提高30.9℃。AutoDock4.2模拟OVA与β-CD分子对接,初步确定β-CD与OVA的包合位置。采用沉淀共聚法制备得到 CS、OVA/CS、OVA-β-CD/CS、OVA-CM-HP-β-CD/CS 四种微球,粒径分布在0.52~4.58μm之间,Zeta电位在0~30 mV之间。OVA/CS、OVA-β-CD/CS 和 OVA-CM-HP-β-CD/CS 载药微球的载药率分别为:30.9%、27.7%和20.4%。以包封率、载药率、粒径、Zeta电位及PI为评价指标,确定三种载药微球的最佳制备工艺。体外释放结果表明,各载药微球在释放1 h时突释在16.5%~25.4%之间,1h后缓慢释放,释放72 h时,累积释放量均低于31.5%,具有良好的缓释效果。载药微球口服免疫Balb/c小鼠,免疫后取血液和小肠组织,采用ELISA法测定小鼠血液中IgG和小肠粘膜中sIgA的抗体滴度。结果表明,与OVA溶液组相比,OVA/CS、OVA-β-CD/CS和OVA-CM-HP-β-CD/CS载药微球免疫7天的小鼠血液中IgG的抗体滴度分别提高了 1.3倍、1.7倍和1.9倍,空肠粘膜中sIgA的抗体滴度分别提高了 1.9倍、3.6倍和3.0倍。推测可能是因为CS微球和CD/CS载体对OVA的保护作用使得更高剂量的OVA被M细胞吞噬,诱导小鼠体内产生更高的免疫应答。