论文部分内容阅读
目的 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)作为儿童遗传性肿瘤综合征(Hereditary cancer syndromes)的最常见类型,其临床管理与分子诊断结果有着重要的相关性。本研究目的在于筛查儿童视网膜母细胞瘤患者RB1基因突变,建立完善的RB1基因检测方法,并探讨RB1基因突变类型与临床表型的相关性,为在国内建立规范、健全的RB临床管理模式打下基础,并为其他遗传性肿瘤综合征的临床管理及转化医学研究拓宽思路。材料和方法 收集85例在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院及复旦大学附属儿科医院确诊的RB患儿外周静脉血标本,包括39例散发双眼及46例散发单眼患儿。提取基因组DNA,联合应用Sanger测序技术及多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)检测RB1基因27个外显子及其附近100bp内含子的变异以及杂合缺失(loss of heterozygosity, LOH)’情况。对于检测结果有异常的患儿尽量收集家系标本进行检测,同时收集患儿临床病例资料进一步分析。结果1、基因检测一般情况85例RB患儿中,检测出RB1基因突变患儿40例(47.1%),包括36例双眼患儿,4例单眼患儿。双眼病例突变检测率为92.3%(36/39),单眼为8.7%(4/46)。40例RB1基因突变患儿中,77.5%(31/40)患儿检测为无效突变(null mutations),22.5%(9/40)检测为框内突变(in-frame mutations)。其中,3例患儿检出相同的无义突变c.1735C>T,5例患儿检出相同的RB1基因全长杂合缺失。故共发现34个不同类型RB1基因突变,20%(8/40)由MPLA方法检测。34个RB1基因突变中7个为未报道过的新突变。此外,共收集患儿一级亲属标本24例,发现2例突变携带者,均为错义突变。2、突变与临床资料分析存在RB1基因无效突变的患儿平均诊断年龄为10.7月龄,而框内突变的患儿平均诊断年龄为13.5月龄。无效突变患儿中双眼占96.8%(30/31),而框内突变患儿中双眼占66.7%(6/9)。基因突变类型与年龄、单/双侧的分析显示差异有统计学意义。但基因突变与临床诊断时的肿瘤分期分析发现两组并无差异。结论联合应用Sanger测序法及MLPA技术是RB1基因突变筛查的有效方法,两者具有互补作用。RB1基因型与表型具有相关性,基因突变类型与肿瘤发病年龄及单／双眼有关,与肿瘤初诊时分期无关。无效突变倾向于表现为更高的外显率,即双眼患病,且具有更早发病的趋势。