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1987年，在美国首次发现了猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），相继在欧洲也出现此病，这给世界养猪业带来巨大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种猪的烈性传染病。研究表明，包括PRRSV在内的一些病毒具有抑制干扰素产生，逃避免疫监控的特点，抑制Ⅰ型干扰素的产生很大程度上归因于非结构蛋白通过阻断IRF3入核，从而对IFN-β启动子和NF-κB启动子起到抑制作用。PRRSV nsp1β在调控宿主免疫反应中发挥重要作用，但具体的作用机制尚不明确。鉴于对nsp1β已有的研究，我们从蛋白质组学的角度着手挖掘nsp1β的生物学功能。在本研究中成功制备了PRRSV nsp1β单克隆抗体，并成功包装了表达nsp1β的重组慢病毒，利用iTRAQ结合LC-MS/MS蛋白质组学技术鉴定到感染PRRSV nsp1β慢病毒的猪肺泡巨噬细胞PAM3D4/21中有425个显著差异表达的蛋白，这些蛋白在调控天然免疫、细胞凋亡等生物进程中发挥着重要作用。主要研究内容如下: 1.PRRSV nsp1β的表达及纯化 将PRRSV nsp1β成功连接到pGEX-6p-1载体上，利用原核表达系统在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白，通过摸索不同的诱导表达条件，最终确定最佳表达条件为37℃、0.8mM IPTG诱导5h，蛋白以不溶性包涵体的形式存在，经纯化后，获得浓度为1.5mg/mL的纯化蛋白。 2.PRRSV nsp1β单克隆抗体的制备 将纯化后的nsp1β蛋白作为免疫原，免疫六周龄雌性BALB/C小鼠，经过细胞融合、ELISA筛选及细胞克隆，共获得3株能稳定分泌抗体的细胞株，分别命名为1G7、2A8、4G10，通过IFA及Western Blot实验对这3株细胞株的特异性进行验证，结果显示这3株单抗均能与PRRSV nsp1β发生特异性反应;同时也进行了小鼠单克隆抗体亚型的鉴定，3株单抗的重链均为IgG1型、轻链均为κ链。 3.PRRSV nsp1β重组慢病毒质粒的包装 在本研究中利用四质粒的慢病毒包装系统，将PLP1、PLP2、VSVG与慢病毒表达载体CMV-MCS-3flag-EF1-copGFP-T2A-Puro共转染于HEK-293T细胞。PRRSVnsp1β基因利用慢病毒系统整合到宿主细胞基因组中，并利用IFA实验验证了nsp1β的表达。 4.PRRSV nsp1β蛋白质组学数据分析 为了进一步研究nsp1β的所发挥的作用，本研究从蛋白质组学的角度来研究PRRSV nsp1β的生物学功能。本研究采用高通量定量蛋白组学方法——iTRAQ技术定量检测在超表达PRRSV nsp1β的PAM3D4/21细胞中宿主蛋白差异表达的情况，共鉴定到425个差异表达的细胞蛋白，包括上调186个和下调239个蛋白质。利用生物信息学分析了差异蛋白的亚细胞定位、参与的生物功能和蛋白相互作用网络。本研究中所鉴定的这些差异蛋白涉及到细胞能量代谢、蛋白质表达、细胞凋亡、免疫调节等相关的功能，使PRRSV nsp1β可以帮助PRRSV更好地利用宿主蛋白，以逃避宿主免疫监视，促进病毒复制，更好地阐释了nsp1β在病毒感染过程中对宿主细胞蛋白所起到的调控作用。