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细胞是生命体系中最基本的结构和功能单位,因此研究细胞与细胞微环境之间相互影响的分子机制具有十分重要的意义,它能够帮助我们对于各种细胞生理机制的理解,研究疾病的发展机理,更好地从分子机制上去研究预防和治疗疾病的方法手段。细胞的微环境对于细胞的生理功能、分化和增殖、以及细胞移动的影响被广泛的研究。微/纳米修饰技术的发展和成熟,为生物科学研究细胞微环境对细胞功能的影响提供了重要的辅助工具。在过去十年中,微/纳米技术,如软印刷技术,电纺丝技术由于其制作成本的低廉和制作工艺的简单,使其在生物研究上得到了广泛应用。荧光共振能量转移技术(FRET)能研究两个荧光发色团之间的能量转移,作为一种应用于分子生物研究的技术手段,它可以通过观察某个分子活性的变化来研究分子信号转导的机制,具有在活细胞上实时观察的优点。
本研究结合了微/纳米表面修饰技术和FRET技术,研究细胞微环境对分子信号转导机制的影响。实验一,应用微接触印刷技术(μCP)在玻璃表面制作以梳状聚合物(comb polymer)为材料的各种形状的细胞阵列。然后在阵列上培养钙离子FRET传感器的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),24小时候后在显微镜下观察ATP刺激引起的钙信号转导分子机制与不受限细胞的差别。方法二,应用聚二甲基硅氧烷(PDMS)对光刻得到的微阵列进行翻模得到具有细胞培养微孔的PDMS薄膜,在带有微孔的薄膜上培养带有Kras-Src的FRET传感器的HUVECs,24小时候后,移除PDMS薄膜,在显微镜下观察Src活性在细胞移动过程的变化。
随着技术的发展,微/纳米修饰技术结合FRET未来能很好的应用于活细胞分子信号转导机制的研究,模拟各种生理和病理环境对于细胞各种生理机制和病理机制进行详细的研究。