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目的:利用LPS建立小鼠肝脏炎症和RAW264.7巨噬细胞系炎症模型,研究竹节参皂苷Ⅴ的保护作用并探索其抗炎作用机制。 方法: ①摸索LPS刺激小鼠炎症模型用药剂量及时间,采用竹节参皂苷Ⅴ保护小鼠后,检测小鼠肝脏指数及小鼠肝脏功能指标。 ②小鼠肝脏HE染色观察小鼠肝脏形态学变化。 ③采用MTT比色法,观察竹节参皂苷Ⅴ对RAW264.7细胞的有效浓度范围。 ④采用Greiss试剂检测NO的释放,确定LPS刺激RAW264.7细胞的最佳刺激浓度及时间,并观察竹节参皂苷Ⅴ对LPS致RAW264.7细胞释放NO的保护作用。 ⑤Elisa技术检测细胞上清及小鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平;RT-PCR法检测小鼠肝脏及巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-1βmRNA表达及细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平。 ⑥Western Blot技术检测小鼠肝脏及细胞NF-κBp65、P-ERK、P-JNK和P-p38等蛋白的表达水平。 结果: ①竹节参皂苷Ⅴ能降低LPS引起的小鼠肝功能指标以及肝脏指数。 ②竹节参皂苷Ⅴ能改善LPS所致小鼠的肝脏炎症损伤。 ③竹节参皂苷Ⅴ对RAW264.7活力没有影响。 ④初筛结果表明LPS能显著提高RAW264.7细胞NO量的释放,当LPS浓度为1μg/mL时,NO释放量与正常组有显著性差异。竹节参皂苷Ⅴ对LPS致RAW264.7细胞NO量的释放有显著的降低作用。 ⑤竹节参皂苷Ⅴ对LPS致小鼠肝炎及细胞中iNOS、TNF-α、IL-1β的释放有显著的抑制作用,且细胞实验中竹节参皂苷Ⅴ对CD14和TLR4 mRNA表达也有抑制效果。 ⑥竹节参皂苷Ⅴ能显著降低组织中NF-κBp65、P-ERK、P-p38、P-JNK蛋白的表达量及细胞中NF-κBp65、P-ERK、P-JNK蛋白的表达,但在巨噬细胞中对 P-p38无明显作用。 结论:竹节参皂苷Ⅴ具有良好的抗炎效果,能显著对抗LPS对RAW264.7细胞NO释放、TNF-α和IL-1β的表达,该作用机制可能与其抑制TLR4介导的NF-κB和MAPK通路有关。