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Fc受体是免疫细胞表面一类重要受体分子，通过与免疫球蛋白Fc段结合触发多种生物学功能，是联系体液免疫和细胞免疫的桥梁。Fc受体定位于效应细胞表面通过与免疫球蛋白Fc段特异结合并触发细胞活动，发挥各种生物学功能，如调理吞噬，清除免疫复合物，介导抗体依赖的细胞毒作用，介导免疫抑制作用，介导I型超敏反应和炎性介质的释放等。Fc受体多是作为一个多亚基的复合体来发挥功能的，一般由一到三种亚基构成：α亚基、β亚基和γ二聚体。其中只有α亚基能与免疫球蛋白Fc段结合，β亚基不能单独完成信号转导，仅对传递给γ链的信号起到了放大作用，γ链是下游信号转导的关键分子，但目前对鱼类中γ链的研究尚不清楚。
本实验以鲤鱼(Cyprinus carpio L.)为研究材料，Trizol法分别提取鲤鱼口腔上皮、鳃、肠、肝脏、脾脏、肾脏、皮肤、心脏、肌肉组织总RNA，RT-PCR方法克隆鲤鱼FcRγ，用生物信息学方法对该序列进行结构和进化分析，并对其在各组织中的表达情况进行了检测。通过鳗弧菌免疫刺激实验，Real-timePCR技术检测FcRγ基因在组织中表达水平的变化，从而研究FcRγ在鲤鱼免疫中的作用。构建pcDNA3.1/Myc-His(+)-FcRγ重组质粒，对小鼠进行基因免疫制备抗血清。Western blot检测抗血清特异性，免疫琼脂双向扩散测定抗血清的效价，免疫组化研究FcRγ的组织分布。结果如下：
(1)本研究中克隆的FcRγ的cDNA序列由539个碱基组成，其中包括47bp的5非翻译区和222bp的3非翻译区，其开放读码框编码89个氨基酸，其中前19个氨基酸为信号肽序列，其成熟产物为一次跨膜的蛋白，跨膜区含有一个保守的带负电荷的天冬氨酸，与α亚基跨膜区的精氨酸或组氨酸相互作用。第63-83个氨基酸是FcRγ发挥生物学作用的关键区域ITAM基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，免疫受体酪氨酸活化基序)，ITAM基序本身的磷酸化，可募集胞质中酪氨酸激酶，使信号分子磷酸化，激活免疫细胞。不同物种FcRγ基因序列之间的同源性分析显示，FcRγ基因存在着种属差异性，在蛋白水平上，FcRγ基因各物种间都存在19-23个氨基酸的信号肽，成熟蛋白含有一个ITAM基序，鱼类的FcRγ与哺乳类的FcRγ结构相似，推断也具有相似的功能。
(2)对RNA进行定量分析后，用M-MLV逆转录酶进行反转录获得cDNA第一链，进行半定量RT-PCR，检测鲤鱼FcRγ在不同组织中的表达量，其中在鳃、脾、肾、等免疫相关组织中含量最大，肝脏和肠中次之，皮肤中的表达量较低，肌肉中未检测到表达。采用鳗弧菌肌肉注射免疫鲤鱼1、2、3、4周，Real-timePCR检测表明FcRγ基因mRNA表达水平在鳃、肾、肠、脾中均呈现一定规律的变化，在免疫诱导后表达量先升高后下调，整体趋势符合机体受刺激后免疫球蛋白的产生规律，揭示FcRγ在鲤鱼免疫中发挥着重要的作用；采用鳗弧菌浸泡免疫鲤鱼0-7天，Real-timePCR检测表明在鳃组织中FcRγ基因mRNA表达呈升高趋势，在浸泡刺激后0.5-5天内表达量持续升高，第7天略有下降，结果表明FcRγ参与机体的天然免疫应答，在机体的免疫防御中发挥着重要的作用。
(3)采用基因免疫的方法制备抗血清，利用得到的抗血清进行琼脂双向扩散以及蛋白质印迹实验。测得抗血清的效价为1：4，蛋白质印迹结果显示，在PVDF膜上显示出了分子量约为10kDa的特异条带。免疫组织化学定位结果显示FcRγ广泛分布于鲤鱼的肠、脾等免疫相关组织。
综上所述，克隆了鲤鱼的FcRγ基因，构建重组质粒pcDNA3.1/Myc-His(+)-FcRγ对小鼠进行基因免疫制备了多克隆抗体，免疫双向扩散和蛋白印迹表明制备的抗体具有较高的特异性，免疫组化结果表明FcRγ在鲤鱼头肾、脾脏、后肠、肝脏及鳃组织中均有表达，且表达量与FcRγ基因在相应组织中的表达量成正相关。本结果为进一步研究FcRγ的功能等奠定了良好的基础。