论文部分内容阅读
滇重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis)隶属于延龄草科重楼属,是中国西南地区特有的珍稀濒危药用植物,也是“云南白药”等一些著名中成药的主要原料植物。近年来滇重楼的市场价格不断攀升,主要原因是需求量增加、供应量减少。滇重楼种子具有“二次休眠”的特性,在自然条件下需要2年才能萌发,时间过长且出芽率低,是制约滇重楼大规模栽培的主要因素之一。利用发根农杆菌侵染药用植物形成毛状根,并从中提取有效成分,是药用资源植物实现可持续发展的有效途径,因此研究野生滇重楼种子萌发的规律以及毛状根培养技术,对于解决重楼的资源问题具有重要意义。目的：探索一种打破滇重楼种子休眠的方法及其愈伤组织和毛状根的诱导技术。方法：利用不同处理液(室温水、800mg/L GA3.20mg/L KT、19mmol/L KNO3、19mmol/L KNO3+800mg/L GA3)对经过预处理的种子进行不同时间(1d、3d、5d、7d、10d)的处理,统计萌发率；对不同外植体(种子、叶片、须根、根状茎,茎)诱导愈伤组织的培养基和激素配比进行筛选和优化；利用发根农杆菌对滇重楼不同外植体进行侵染、转化,诱导毛状根。结果如下：1、滇重楼种子在连续经过4℃低温层积4-5个月、红外光照射30min、二次变温(4℃-40℃-20℃)处理、混合液(19mmol/L KNO3+800mg/L GA3)浸泡7d后,休眠作用能得到明显解除,播种在营养钵(珍珠岩：蛭石=1：1)中60d,萌发率可升至40%。2、在茎、叶、须根、根茎、胚乳、胚六种材料中,只有种胚能诱导出愈伤组织,而且必须进行胚乳看护培养；在生长调节剂中,IAA对重楼愈伤组织诱导作用最为显著；6-BA对重楼愈伤组织分化有明显调节作用；诱导愈伤组织最佳培养基为MS+2mg·-L-1IAA+0.02mg-L-16-BA,诱导率为53.33%；3、对胚根长至2cm的萌发种子进行HgCl2消毒的最合适时间是10min,既能控制污染率又不伤及胚芽的活性；在1000lux的光照条件下,去除胚乳的种子在附加0.5mg6-BA和0.5mg IAA的MS培养基上培养30d后就可形成一个具有单叶的完整植株。4、选取处于生长对数期(菌浓0.6-0.8)的发根农杆菌,侵染经过预培养(在无激素MS培养基上培养2天)的外植体(胚乳、胚、叶片、茎段、须根、根状茎、愈伤组织),再经共培养和除菌培养,结果发现,只有叶片在经过一系列处理后可诱导出根状物,而且生长缓慢。结论：种皮透性差是影响滇重楼种子萌发的重要因素；外植体和激素是诱导重楼愈伤组织的关键；外植体选择是决定滇重楼毛状根诱导成功与否的最重要因素。