哺乳动物生殖细胞的分化是保持物种延续不可缺少的方式。精原细胞,特别是其中的精原干细胞是产生精子的源泉,通过体外培养精原细胞获得成熟的精子,对于保护濒临灭绝的物种遗传资源具有重要理论和现实意义。另外,精原干细胞还可以进行体外冷冻保存、遗传操作和移植,因而它对于医学研究、生物学实验和生物技术的研究具有重要的价值。试验采用物理和化学方法相结合,对小鼠的睾丸支持细胞、睾丸间质细胞和精原细胞进行分离、纯化,并进行传代培养和染色鉴定,观察其形态结构和生物学特性。通过添加不同的营养因子或与睾丸支持细胞、睾丸间质细胞和精原细胞共培养,对影响精原干细胞分化的一些因素进行了初步探讨,为进一步建立精原干细胞的体外分化培养体系奠定了基础。本研究主要获得了以下结果。1.选择16～22d的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶分步消化, 0.05M Tris-HCL低渗处理后,平均每个睾丸可获得2×106个睾丸支持细胞,细胞的纯度可达89.87%,活细胞数占总细胞数的95.15%。睾丸支持细胞的贴壁性状良好,在培养至第2d时进入对数生长期,细胞增殖旺盛,至第6d时进入平台期,增殖速度开始减慢,但培养到第7d仍未见有调亡的细胞出现。2.选择6周龄左右的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶限时消化, Percoll密度梯度离心后,获得的睾丸间质细胞能够维持正常的生长特性,活细胞率较睾丸支持细胞有所降低,平均达85.02%。3.选择7～8d的雄性昆明小白鼠,经过胶原酶和胰蛋白酶限时消化, Percoll密度梯度离心后,精原细胞主要分布于27%-35%的Percoll梯度间。再利用选择性贴壁法,结果获得的精原细胞的纯度达62.50%,但是,单独培养小鼠的睾丸精原细胞至第3d时,细胞即开始出现凋亡现象。4.在单独培养的精原细胞的培养液中分别添加促卵泡激素(FSH)和睾酮,FSH对睾丸精原细胞的分化无显著的促进作用,睾酮对精原细胞的体外分化培养有一定的促进作用。在培养液中添加成年鼠的睾丸提取液,结果发现,睾丸液对精原的细胞的体外分化有显著的促进作用。睾丸支持细胞、睾丸间质细胞与精原细胞共培养,也能促进睾丸精原细胞的分化,但效果不如睾丸液显著。另外,不同的消化传代方法,对精原细胞的增殖分化和传代数影响也不同。