滇丹参抑制瘢痕形成及其相关机理的实验研究

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【目的】探讨滇丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为和动物瘢痕模型的影响及病理改变,揭示其对瘢痕的作用及机制,为临床预防和治疗瘢痕提供分子及病理学水平的理论依据。 【方法】(1)对瘢痕成纤维细胞进行体外培养,加入用培养液稀释成不同浓度的滇丹参注射液(0.1g/ml、0.2g/ml、0.4g/ml、0.6g/ml),采用光镜观察、MTT比色测定分析、流式细胞术对成纤维细胞DNA含量、细胞周期分析,Fas、Bcl-2含量的测定及细胞凋亡(TUNNEL)的分析。(2)建立猪背部瘢痕模型,对其进行体内实验,采用HE染色、Masson氏三色染色法、透射电镜、原位杂交等检测方法。通过以上实验观察分析,以研究滇丹参对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响及病理改变。 [结果」1.体外培养瘢痕成纤维细胞光镜观察显示:实验组加入滇丹参后,细胞生长密度降低,梭状突起回缩,细胞双极变得圆顿,细胞形态变得不规则。 2.MTT比色测定结果:与相应的对照组相比,加入滇丹参组成纤维细胞的生长受到明显的抑制(P<0.05)。 3.流式细胞术对成纤维细胞DNA含量、细胞周期分析,Fas、Bcl-2含量的测定及细胞凋亡(TUNNEL)的分析结果显示:与对照组相比,实验组加入滇丹参后增殖期(S-G2-M)细胞百分数明显降低,细胞凋亡水平明显提高。对Fas、Bcl-2蛋白表达量的测定结果显示:与对照组比较,实验组Bcl-2蛋白表达量降低,Fas蛋白表达量升高。TUNNEL结果显示:与对照组比较,实验组凋亡率增高。 4.动物模型标本病理染色:与对照组相比,实验组注射滇丹参后,成纤维细胞减少,胶原排列趋于整齐,较疏松,纤维之间的间隙增大。 5.动物模型标本透射电镜观察:与对照组相比,成纤维细胞较少,纤维细胞较多,粗面内质网不发达,细胞核异染色质丰富,胶原排列较疏松。部分成纤维细胞内粗面内质网过度扩张,细胞呈现后成纤维细胞的特点。 6.动物模型标本Decorin原位杂交分析:在正常皮肤中Decorin mRNA表达见于真皮层,与对照组相比,实验组注射滇丹参后2个月在真皮层出现弱阳性表达,而对照组中未见表达。 [结论」滇丹参对瘢痕成纤维细胞的生长、增殖及胶原合成有抑制作用,不同的浓度作用效果有差别。
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