背景与目的: 近年来的研究表明,肾素-血管紧张素系统(RAS)在心血管疾病的发生、发展中起着非常重要的作用。目前认为RAS 的主要效应分子血管紧张素系统II 有两种亚型受体,即AT1 和AT2 受体。研究表明血管紧张素II的生物效应主要是通过AT1 受体实现的。该受体不仅在调节心脏和血管活动中起重要的生理性调节作用,而且它的过度活动还能引发许多重要的病理生理后果,因而在诸多心血管疾病的发病中起着关键性作用。近年来,在许多心血管疾病患者的血清中发现存在有心脏G-蛋白偶联受体家族中几种主要受体(如肾上腺能β1 受体、α1 受体、胆碱能M2 受体等)的自身抗体,并证明这些自身抗体均能专一性识别相应受体的细胞外第二环功能表位肽段,并对各该受体表现有激动剂样的刺激效应,且抗体对受体的刺激作用与激动剂不同,没有脱敏现象,因而可呈现持续的刺激效应,而引发病理改变。这提示在心血管疾患的发病中有受体抗体的免疫学机制参与。最近几年,发现在先兆子痫和恶性高血压患者血清中存在有抗AT1受体自身抗体,但其参与发病的作用尚不清楚。为阐明与心血管疾病有重要关系的AT1 受体的自身抗体在心血管疾病发病中的作用,须首先了解AT1 受体抗体对心血管系统的生物效应,故本实验研究了AT1 受体抗体对心血管功能的影响及其机制,实验分以下五项内容: 一. 抗血管紧张素AT1受体抗体的制备 目的: 近年来的研究发现,许多心血管疾病患者的血清中存在有心脏G-蛋白偶联受体家族中几种主要受体的自身抗体,并证明这些自身抗体均能专一性识别相应受体的细胞外第二环功能表位肽段,且对各该受体表现有激动剂样的刺激效应。由于各受体的氨基酸序列在不同种属间有高度保守性,并证实心血管疾病患者血清中的抗受体自身抗体与用它们的受体靶肽段作为抗原免疫动物所生成的抗肽抗体具有相同的免疫与功能特性。因此我们利用人工合成的人AT1 受体细胞外第二环表位功能肽段,主动免疫大鼠,使其产生高滴度的抗AT1 受体抗肽抗体,借以进行抗体对心血管活动的生物学效应研究。材料和方法: 研究用的人AT1 受体细胞外第二环表位功能肽段(165-191 位)由华中科技大学同济医学院合成。其氨基酸序列为: I-H-R-N-V-F-F-I-E-N-T-N-I-T-V-C-A-F-H-Y-E-S-Q-N-S-T-L 使用上述的抗原肽段对Wistar 大鼠进行主动免疫,获取抗AT1受体抗血清,其效价用SA-ELISA 方法检测。然后利用MAb Trap Kit 试剂盒对抗血清中的抗体IgG 进行提取和纯化。纯化后的抗体蛋白液混合后,先经PAGE 胶凝胶电泳检测其纯度,然后使用考马斯亮兰试剂盒对抗体进行定量。结果: 1. 主动免疫的结果: 抗体滴度从免疫后的第二周开始升高(图1;表1)。第二次加强免