【摘 要】
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自然界中存在广泛的微生物资源,其生存环境各异,且有丰富的基因多样性。从自然界中广泛分离污染物分解菌,研究其污染物降解活性和基因特征之间的关系是从分子水平揭示微生物
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自然界中存在广泛的微生物资源,其生存环境各异,且有丰富的基因多样性。从自然界中广泛分离污染物分解菌,研究其污染物降解活性和基因特征之间的关系是从分子水平揭示微生物的污染物降解活性及其影响因素,从而研制出高效污染物降解菌的最有效方法。本文旨在揭示自然高盐环境中耐盐苯酚降解菌的生物多样性、代谢多样性以及对苯酚的降解活性,为今后基因序列和苯酚降解活性之间的关系研究提供参考和依据。本文以内蒙古地区额济淖尔盐湖、吉兰泰盐湖以及查干淖尔盐湖为研究对象,驯化分离了耐盐苯酚降解菌。研究发现,从额济淖尔湖驯化培养出的菌群能够显著降低培养液中的苯酚浓度。应用以苯酚为唯一碳源的固体培养基分离出了该菌群中的微生物,并挑选其中两株进行了16SrDNA法鉴定。结果表明挑选出的两株苯酚降解菌分别属于丙酸杆菌属和盐单胞菌属。利用苯酚单加氧酶基因、邻苯二酚1,2双加氧酶基因以及邻苯二酚2,3双加氧酶基因的简并引物检测了苯酚降解过程中的关键酶的编码基因。在属于丙酸杆菌属的苯酚降解菌中检测到了苯酚单加氧酶基因和邻苯二酚1,2双加氧酶基因,说明该菌可能利用苯酚单加氧酶将苯酚转化为邻苯二酚,并将邻苯二酚进一步分解为粘康酸。虽然对PCR条件进行了多次优化,在属于盐单胞菌的苯酚降解菌中未能检测到任何功能基因,说明该菌降解基因序列与目前发现的降解基因序列有较大的差异。应用含200 mg/L苯酚,10%盐度的培养液初步试验了分离出的菌株对苯酚的降解活性。经一轮的驯化培养后,丙酸杆菌能够在12天之内降解99.5%的苯酚,盐单胞菌在12天之内降解99.0%的苯酚。研究发现,50mg/L的酵母提取物对丙酸杆菌的苯酚降解活性没有影响,而不存在酵母提取物时盐单胞菌对苯酚的降解活性显著降低。本文对于自然环境中耐盐苯酚降解菌多样性和降解基因多样性了解以及污染物处理工程菌的开发利用具有重要的科研价值。
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