环境雌激素(environmental estrogens,EES)又称为环境荷尔蒙(environmental hormones)或环境内分泌扰物(environmental endocrine disrupting chemicals, EEDS),指进入生物体内后可通过干扰生物体自身激素的合成、分泌、转运、结合、活性反应、代谢、降解或产生类似生物体自身激素的作用,对生物有机体维护正常的动态平衡、繁殖、生长及行为有不利影响的环境化学物质(生物体外源物质)。全球范围内存在的环境激素致使许多物种个体减少、雄性动物雌性化,它们通过积蓄在生物体内后阻碍神经系统的传输、毒害生殖腺、影响肝脏、肾脏内的酶系统和降低机体的免疫机能等多种途径造成生物体内的激素失调、生殖器官畸形甚至癌变。文献表明长江水中的主要EES污染物可能是邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)。比如,有机污染严重的长江水和嘉陵江水(重庆段)的污染物绝大多数属于EES,其中DBP在5个水厂丰水期和枯水期的源水中几乎均有检出,其浓度高达9. 48μg/ L。DBP本身作为一种增塑剂在医疗用品、化妆品中大量使用,由于其潜在的危害已被美国和欧盟列入优先控制的污染物名单。目前认为,DBP的生殖发育毒性的一个重要的机制是其内分泌干扰作用。由于神经、内分泌是密切联系又互相影响的两个系统,围生期中内分泌系统受到干扰很可能对神经系统的发育产生影响。已有文献报道EES会影响大鼠下丘脑神经元及神经胶质细胞的发育。例如双酚A会阻碍神经元的发育,而三硝基苯酚则对神经元与神经胶质细胞的发育都有抑制,但是关于DBP是否影响神经干细胞的发育和分化尚无相关文献报道,为此我们应用多种方法技术初步研究了DBP对神经干细胞增殖分化和凋亡的影响。在本研究中,我们首先将试验用40只孕大鼠从妊娠E0开始分为四个组,3个实验组分别给予DBP 25、75、225 mg/(kg·d) (以玉米油为溶剂)灌胃,对照组则给予等体积玉米油灌胃,直到产仔后。取出生0天的新生大鼠SVZ区,无菌环境中进行神经干细胞培养。用nestin进行免疫荧光染色确定是否为神经干细胞。每天比较各组神经干细胞克隆球的直径与增殖情况。传三代后的神经干细胞接种于经多聚赖氨酸处理后的玻片上,加入含10%胎牛血清的培养基进行分化培养,七天后取出玻片,用抗Neu-N抗体标记神经元,用抗GFAP抗体标记星形胶质细胞。镜下观测记录细胞间形态差异,并用流式细胞仪检测两种细胞比例。以上实验得到如下结果:1.大鼠孕期染DBP致子代神经干细胞克隆球直经减小、增殖速度减慢,克隆球活力各组均低于对照组。2.大鼠孕期染DBP致子代神经干细胞增殖能力降低。与对照组相比,中、高剂量染毒组新生鼠神经干细胞克隆率明显低于对照组。3.DBP处理使高剂量组神经干细胞分化为星形胶质细胞比例显著增加。4.分化后的神经元和神经胶质细胞形态随着母体染毒剂量增大,细胞形态变化明显。特别是星形胶质细胞的细胞突起逐渐变短,变粗,以高剂量染毒后为明显。以上结果证实了大鼠孕期染DBP会影响新生鼠神经干细胞的增殖与分化,对其子一代神经系统的发育产生影响。为了进一步验证DBP对神经系统发育的影响,我们检测了各组间细胞凋亡情况,结果发现高剂量药物处理组TUNEL阳性细胞数率明显高于实验对照组;低剂量药物处理组和中剂量药物处理组TUNEL阳性细胞率较实验对照组无显著性差异。结论:雌性大鼠孕期染DBP会对其子一代神经干细胞的增殖、分化、凋亡产生影响。从研究结果可知,DBP抑制了神经干细胞的增殖,降低了其存活率,并促使神经干细胞向星形胶质细胞方向发展,神经元的比例减小。从神经干细胞分化以后的形态来看,DBP会使神经干细胞分化后的星形胶质细胞突起变短、变粗。另外,DBP还增加了神经干细胞的凋亡率。并且这一系列的变化呈剂量相关型。因此DBP会影响神经干细胞的正常发育,从而影响神经系统的正常发育。