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电子传递是细菌新陈代谢的固有特征,细菌通过电子传递获取进一步生长繁殖的能量,电子穿梭体在细菌电子传递过程中具有重要作用。因此,挖掘细菌关键的内源性电子穿梭体可为抑制细菌生长或杀灭细菌提供有效靶标。本文以大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25922为研究对象,采用电化学微分脉冲伏安(DPV)法探究了大肠杆菌的关键胞外电子穿梭体,结合荧光光谱、高效液相色谱(HPLC)、色谱质谱联用(HPLC-MS-MS)对其进行解析,并对其作用进行初步探究,拟为探寻新型抑制靶标和机理提供新思路。具体结果如下:(1)建立了检测E.coli ATCC 25922的电化学活性方法,并进行了方法条件优化。通过循环伏安法(CV)和微分脉冲伏安法(DPV)分别对大肠杆菌菌体及其生长后的培养基上清液进行分析,发现大肠杆菌能够分泌电子穿梭体与电极之间进行胞外电子传递,该电子穿梭体的表观电位在-0.45 V左右。对电化学检测大肠杆菌内源性电子穿梭体的方法进行了条件优化,确定振幅60 mV,周期0.1 s为最佳测试条件。计时电流(i-t曲线)结果显示在0.1 V恒电势下,随着细菌生长,电流响应出现先升高后降低的现象,表明-0.45 V氧化峰与大肠杆菌生长代谢具有密切相关性。(2)探究了内源性电子穿梭体在大肠杆菌表面的存在方式。对大肠杆菌周围包裹的胞外聚合物(EPS)进行提取,并通过菌落平板计数、TEM、粒度测定评价了不同提取条件对细胞活性的影响,最终确定45℃加热5 h既能将EPS提取较彻底,又对细胞几乎无损害,为最佳提取条件。最后,对去除EPS后的大肠杆菌进行微分脉冲伏安测试,结果显示电子穿梭体主要以游离状态存在于大肠杆菌表面。(3)探明了大肠杆菌的内源性电子穿梭体为核黄素。通过微分脉冲伏安法测得黄素类物质(包括核黄素、FMN、FAD)的氧化峰电势均在-0.45 V左右,与大肠杆菌培养基及大肠杆菌EPS的电信号一致,初步推断大肠杆菌分泌的电子穿梭体为黄素类物质。之后通过荧光光谱、高效液相色谱(HPLC)、高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS-MS)进一步证明了 EPS中的主要氧化还原活性物质就是核黄素。最后,通过高效液相色谱法研究了大肠杆菌生长繁殖过程中的黄素分泌情况,并证明了核黄素可以促进厌氧条件下大肠杆菌的生长,且能够提高大肠杆菌表面的电子传递效率。