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目的：构建免疫细胞性一氧化氮供体CD3AK/iNOS(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cell，CD3AK；inducible nitric oxide synthase，iNOS)并探讨其对慢性粒细胞白血病(chronic myeloid 1eukemia，CML)患者肿瘤细胞的体外净化作用，为白血病体外净化提供一种更有效的方法。
方法：培养、扩增PA317/pLNC-iNOS细胞并用G418筛选；NIH3T3细胞测定病毒滴度；扫描电镜观察PA317/pLNC-iNOS细胞表面的病毒颗粒。抗CD3单克隆抗体激活分离的外周血单个核细胞，病毒感染靶细胞CD3AK及G418筛选。逆转录一聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)检测CD3AK/iNOS细胞中的iNOS基因的表达；硝酸还原酶法检测 CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含量以及NOS活性。系列稀释半定量巢式RT-PCR检测CML患者肿瘤细胞经CD3AK/iNOS细胞净化后bcr/abl融合基因的表达水平。
结果：(1)PA317/pLNC-iNOS细胞能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。(2)NIH3T3细胞测定病毒滴度为1.0×10<5>CFU(colony forming unit)/ml。(3)扫描电镜观察PA317/pLNC-iNOS细胞表面有病毒颗粒。(4)RT-PCR检测发现CD3AK/iNOS细胞中有iNOS mRNA的表达。(5)CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含量，NOS活性较CD3AK细胞明显升高。经统计学检验，上述两项指标均有显著性差异。(6)系列稀释半定量巢式RT-PCR检测发现经CD3AK/iNOS细胞净化后，CML患者肿瘤细胞bcr/abl融合基因的表达明显降低。
结论：逆转录病毒可介导iNOS基因转入CD3AK细胞，成功地构建了CD3AK/iNOS细胞。CD3AK/iNOS细胞对CML患者肿瘤细胞有较强的体外杀伤作用，CD3AK/iNOS可能成为一个有效的自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation，AHSCT)体外净化方法。RT-PCR可作为评估体外净化效果较为敏感和较为可靠的检测方法。