沙门氏菌可视化检测新方法研究

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沙门氏菌是食品安全检测的关键目标物质之一,因此,快速准确地检测沙门氏菌具有重要意义。传统的沙门氏菌检测技术需4~7天,不能满足及时、快速检测食品安全性的需求。目前,针对沙门氏菌的检测方法多种多样,例如多重PCR、酶联免疫吸附技术、环介导等温扩增方法等。但这些新技术往往在检测灵敏度、特异性或方面存在不足,有的方法需要用到昂贵的仪器,不利于向基层推广。针对以上问题,本文分别以酪胺放大技术和适配体识别-金标银染技术为基础,提出了沙门氏菌可视化检测的新方法。首先,本文以沙门氏菌DNA为检测目标物,基于寡核苷酸探针杂交、酪胺放大技术和辣根过氧化物酶(HRP)底物显色反应,构建了一种沙门氏菌快速可视化检测的新方法。酪胺是HRP的底物,利用生物素-亲和素反应将杂交产物固定在微孔板上,利用HRP催化酪胺在反应位点大量沉积、放大反应信号,再利用HRP的生色底物TMB对目标物进行显色检测。在最优条件下,本方法线性检测范围为1~1000pmol/L,检测限为0.5pmol/L。其次,本文尝试以菌为直接检测目标物,基于适配体识别-金标银染技术建立了另一种简单、灵敏、快速的可视化检测方法。在微孔板表面组装亲和素-生物素化适配体-沙门氏菌-纳米金标记巯基化适配体复合物。纳米金通过Au-S共价键标记在这一体系上,通过银增强放大反应信号,在630nm处测得吸光度值。在最优条件下,沙门氏菌的浓度在101~105cfu/mL范围内时,与银染后的吸光度值存在线性关系(R2=0.9965),本方法的检测限为10cfu/mL。本实验还利用本法对实际水样进行检测,并与使用传统平板计数法得到的结果进行比较。此外,本实验研究了银染试剂及反应条件对银染效果的影响,制备了与市售银增强液效果相近的银染试剂,并研究了纳米金颗粒的聚集状态对银染的影响。
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