NF-κ B、Lin28B对鼠Tenon’s囊成纤维细胞增殖作用的实验研究

来源 :青岛大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:g348386408
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:本实验利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活大鼠Tenon’s囊成纤维细胞中的核转录因子-κB(NF-κB),检测成纤维细胞的增殖情况与NF-κB、RNA结合蛋白Lin28B的表达变化,以研究NF-κB及Lin28B在成纤维细胞增殖中的作用机制。
  方法:原代培养大鼠的Tenon’s囊成纤维细胞,利用免疫组化法进行鉴定。取传至第四代的细胞消化成为2×104/ml悬液种入96孔板,分别加入终浓度为10ng/ml、50ng/ml和100ng/ml的TNF-α溶液,并于作用3h、6h、12h、18h及24h后,借助CCK-8法检测鼠的Tenon’s囊成纤维细胞的生长状况。取传至第四代的细胞以2×104/ml消化悬液种入12孔板,随机分为三组:A组为正常对照组,加入不含药物的正常培养基,B组加入等量含TNF-α的终浓度为50ng/ml的培养基,C组在加入100μmol/L的PDTC干预细胞0.5h后加入等量TNF-α终浓度为50ng/ml的培养基,培养12h后检测细胞生长状况,并行免疫组化及Real-timePCR法检测各组NF-κBmRNA及Lin28BmRNA表达量的变化。
  结果:
  1.原代培养的大鼠Tenon’s囊成纤维细胞多呈长梭形,胞体周边可见细长状突起,细胞核为圆形,位于细胞中央。行免疫组化染色鉴定,示细胞波形蛋白抗体染色呈阳性,角蛋白染色呈阴性,证实所培养的细胞为成纤维细胞。
  2.CCK-8法检测结果示,TNF-α激活NF-κB的最佳作用浓度为50ng/ml,最佳作用时间为12h。
  3.三组成纤维细胞的OD值差异有统计学意义(F=97.216,P=0.000),B组细胞的OD值较A组明显增加(P=0.012),C组细胞的OD值较B组显著降低(P=0.017),但与A组相比较差异无统计学意义(P=0.175)。
  4.三组成纤维细胞中的NF-κBmRNA表达差异有统计学意义(F=496.996,P=0.000),A组成纤维细胞的胞质中表达少量的NF-κB;而B组细胞中的NF-κB则大量表达于细胞核中,且NF-κBmRNA的表达量较A组明显提高(P=0.000);C组细胞的胞质与胞核中均表达少量NF-κB,而C组的NF-κBmRNA与B组相比表达量降低(P=0.000),与A组比差异无统计学意义(P=0.401)。
  5.三组成纤维细胞的Lin28B主要在胞质中表达,且Lin28BmRNA表达量差异有显著统计学意义(F=552.956,P=0.000)。A组成纤维细胞表达极少量Lin28BmRNA;B组细胞中Lin28BmRNA的表达量则较A组有明显升高(P=0.000);C组细胞中的Lin28BmRNA表达量较B组明显降低(P=0.000),与A组相比则差异无统计学意义(P=0.661)。结论:
  1.TNF-α可以激活Tenon’s囊成纤维细胞中的NF-κB,进一步激活Lin28B的转录和表达,导致了成纤维细胞的增殖;
  2.PDTC可以阻断细胞中NF-κB的活化,进而下调Lin28B的表达,从而抑制Tenon’s囊成纤维细胞的增殖。
其他文献
目的:观察眼外肌局部注射胰岛素样生长因子-I(insulin-likegrowthfactor-I,IGF-I)后实验性外斜视猫内直肌纤维连接蛋白(fibronection,FN)和层黏连蛋白(laminin,LN)表达变化,探讨药物对斜视发生后眼外肌细胞外基质的影响,为斜视药物治疗可行性提供理论依据。  方法:选取处在视觉发育敏感期的4~6w龄幼猫45只,随机划分为实验组、无菌水对照组和空白对照
学位
目的:讨论眼附属器淋巴组织增生性疾病中Livin和Caspase-3的表达、两种因子的相关性和临床意义,分析两者与该类疾病临床病理特征之间的联系,初步探讨二者在淋巴瘤的发生中的作用。  方法:收集青岛大学医学院附属医院眼科病理室从1995年06月至2015年06月手术切除的B细胞淋巴瘤标本,其中眼部B细胞非霍奇金淋巴瘤40例(黏膜相关淋巴组织结外边缘区B细胞淋巴瘤25例,浆细胞瘤8例,弥漫大B细胞
目的:观察注射用鼠神经生长因子(Nervegrowthfactor,NGF)治疗视神经挫伤后视功能变化,探讨其作为视神经挫伤临床药物治疗的有效性、安全性及可行性。  方法:收集2014年2月至2015年12月期间于青岛大学附属医院眼科就诊符合一定条件的视神经挫伤患者,共57例(57眼)患者随机分为鼠神经生长因子观察组32例及对照组25例。观察组给予注射用鼠神经生长因子30μg、肌肉注射,1次/d,
目的:通过观察烟曲霉菌感染的人角膜上皮细胞中肺表面活性蛋白D(surfactantproteinD,SP-D)的表达,探讨SP-D在真菌感染过程中激活机制及其与TLR4信号传导通路之间的相互作用。  方法:以体外培养的正常人永生化角膜上皮细胞作为对照组,实验组以灭活的烟曲霉菌菌丝、TLR4抑制剂CLI-095刺激人永生化角膜上皮细胞,用Westernblot法检测SP-D蛋白表达,用real-ti
目的:通过检查间歇性外斜视患儿斜视度、眼位控制力、立体视锐度判断其斜视程度,应用间歇性外斜视生存质量量表评估其生存质量状态,进一步分析并探讨间歇性外斜视生存质量量表评分与斜视严重程度的相关性。  方法:前瞻性研究。收集2015年1月至2016年1月于青岛大学附属医院眼科被确诊为间歇性外斜视基本型的5-17岁儿童患者及其陪同的一名父母各48例,分别填写间歇性外斜视生存质量量表(Intermitten
目的:探讨凝胶多糖在人角膜上皮细胞(HCECs)对烟曲霉菌的固有免疫应答中的作用以及C型凝集素受体Dectin–1是否能够介导凝胶多糖的免疫调节作用。  方法:用不同浓度(50,100,200,400μ克/毫升)和不同时间的凝胶多糖刺激HCECs。然后用经过和未经过昆布多糖(Dectin-1受体阻断剂,0.3毫克/毫升)处理的HCECs,另外用烟曲霉菌菌丝刺激凝胶多糖。肿瘤坏死因子(TNF-α)白
目的:  研究在眼附属器B细胞非霍奇金淋巴瘤中,LITAF(lipopolysaccharide-inducedtumornecrosisfactor-alphafactor,脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-a)基因的表达特点,探讨与临床病理参数的关系。  方法:  从青岛大学附属医院眼科收集手术切除50例眼附属器B细胞非霍奇金淋巴瘤石蜡标本和同时期手术切除的10例反应性淋巴组织增生病变组织石蜡标本。5
目的:观察雷珠单抗玻璃体腔注射治疗视网膜中央静脉阻塞(centralretinalveinocclusion,CRVO)继发黄斑水肿(macularedema,ME)的有效性和安全性。  方法:2013年10月至2014年10月,于青岛大学附属医院眼科确诊的CRVO继发ME患者24例(24眼),将其随机双盲分配到组I和组II,组I和组II前3个月均给予复方血栓通胶囊口服,组I前3mo,每月1次雷珠
学位
目的:观察外源性IGF-1对外斜视猫模型内直肌肌动蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)表达变化的影响及其与治疗时间的相关性,探讨外源性IGF-1治疗斜视的可行性。  方法:选择处于视觉发育敏感期内幼猫(4-6w)45只,通过外科手术的方法制作外斜视模型,随机分至实验组、无菌水组和空白对照组3个组中,每组15只,术后立即分别向实验组及无菌水组内直肌注射50μl(5μg)IGF-1或50μl无
学位
目的:  分析研究视觉诱发电位(VisualEvokedPotential,VEP)在注射用鼠神经生长因子治疗外伤性视神经挫伤后的变化情况,探讨和评估鼠神经生长因子的治疗效果,为后期的临床应用提供理论依据。  方法:  1.病例选择  对来自2013年10月至2015年6月于青岛大学附属医院眼科就诊的诊断为外伤性视神经挫伤的门诊患者52例,随机分为两组。治疗组32例(32眼)主要采用注射用鼠神经生