目的比较纤维连接蛋白（RetroNectin,RN）诱导的CIK细胞体外增殖能力、主要效应细胞含量和细胞毒活性等方面与传统方法诱导的CIK细胞的差异,以期建立一种高效、简便的体外扩增CIK细胞的方法,并从机理上作一些探讨。方法抽取10名健康人（男性5名,女性5名,年龄范围在37岁—57岁,平均年龄48.2±10.7岁）外周静脉血每人50毫升,用淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞（PBMC_s）,同一供体来源的PBMCs均分到A、B两组。A组采用新培养方法:即用纤维连接蛋白和CD3单克隆抗体提前24小时包被培养瓶,以后培养体系中只加入IL-2、无血清培养基KBM551。B组采用传统方法:提前24小时用CD3单克隆抗体包被培养瓶。培养当天加入重组人IFN-γ、IL-1α、IL-2,以后仅加入重组人IL-2、无血清培养基,37℃,5%CO₂浓度细胞培养箱内培养。每3天台盼蓝染色检测细胞存活率、记录细胞绝对数。于培养的第7、14、21天用流式细胞仪测定各组细胞免疫表型。MTT实验测定CIK细胞对多种人瘤细胞系（Hela、K562、A549、G823）的体外抑瘤率。用流式细胞仪测定新方法诱导的效应细胞分泌细胞因子IFN-γ、IL-4、穿孔素和颗粒酶B的水平。结果与传统方法相比较,新方法促细胞增殖能力更强,最大扩增倍数是传统方法的2.2倍,P<0.05。随着培养时间的延长,CD3⁺、CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD16⁺CD56⁺细胞比例上调,CD3⁺CD4⁺细胞比例下降。新方法显著增加了CD3⁺CD8⁺细胞亚群（杀伤性T淋巴细胞）的比例,培养第14天CD3⁺CD8⁺细胞的比例A、B组分别为77.30±6.72%和68.31±8.87%,P=0.02;第21天分别为76.264±8.61%和66.79±9.52%,P=0.042。对CD3⁺CD4⁺细胞（辅助性T淋巴细胞）和CD3⁺CD16⁺CD56⁺细胞（培养细胞中的主要效应细胞）的影响A组与B组无差别,P>0.1。主要效应细胞CD3⁺CD16⁺CD56⁺细胞绝对数扩增倍数两组分别为3778倍和2069倍。培养第15天时各组细胞存活率均在95%以上,分别为97.71±1.07%、95.48±2.01%,P>0.05。培养第15天的细胞对Hela、K562、A549、GM823等瘤株的体外细胞毒试验,20:1和40:1两个效靶比杀伤率分别为A组:32.47±7.51%和55.15±8.43%（Hela）,48.43±8.15%和65.75±8.39%（K562）,58.58±8.52%和65.73±14.79%（A549）,67.54±18.37%和74.28±15.71%（G823）。B组:45.30±5.16%和65.43±4.91%（Hela）,47.16±6.13%和62.90±7.25%（K562）,70.8±11.23%和83.44±13.76%（A549）,75.10±7.24%和88.6±12.28%（G823）。A组与B组无差别,P值>0.05。新方法诱导的效应细胞分泌较高水平的IFN-γ、颗粒酶B、穿孔素等杀瘤效应分子,分泌低水平的IL-4。结论新培养方法促细胞增殖能力强;未改变CIK细胞的属性;CD3⁺CD8⁺杀伤性T细胞比例显著增多;培养后的效应细胞激活后所分泌的细胞因子IFN-γ明显增高。IL-4水平无变化。颗粒酶B、穿孔素呈阳性。体外细胞毒活性与传统方法相当,可以替代传统方法。