矮生二裂委陵菜化合物改善胰岛素抵抗分子机制研究

来源 :青海师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yangliang0510
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采用α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选模型,测定了矮生二裂委陵菜(Potentilla bifurca var.humilior R.)7个化合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性及抑制剂类型;诱导分化3T3-L1脂肪细胞,探究矮生二裂委陵菜化合物对3T3-L1脂肪细胞分化的影响,利用试剂盒测定化合物对IR-3T3-L1脂肪细胞糖摄取能力及IL-6的影响,Western blot法测定胰岛素信号通路PI3K/Akt中相关蛋白的表达,探究矮生二裂委陵菜化合物改善IR的作用机制。1.利用α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选模型对矮生二裂委陵菜7个化合物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性及抑制剂类型测定,结果表明,化合物quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside(1)、myricetin(2)、quercetin-3-O-β-D-xylose(3)、quercetin-3-O-(6’’-O-trans-p-coumaroyl)-β-D-glucoside(4)、quercetin(5)、(-)-epicatechin(6)、1-O-coumaroyl-β-D-glucose(7)均有较高的抑制活性,IC50分别为0.065、0.176、0.318、0.082、0.695、0.720、0.003 mmol·L-1;酶抑制剂类型分别为:化合物1、2、3、4、7为竞争性抑制剂,化合物5为非竞争性抑制剂,化合物6为反竞争性抑制剂。2.采用“鸡尾酒法”诱导分化3T3-L1前脂肪细胞为成熟脂肪细胞,分化过程中用7个化合物进行干预,通过油红O染色及TG试剂盒测定化合物对3T3-L1前脂肪细胞的分化影响,结果表明矮生二裂委陵菜化合物可减少3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂滴的积累及TG的含量,抑制其分化。3.用胰岛素进行3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立,结果表明,在胰岛素浓度为10-6mol·L-1,作用时间为48 h时,成熟的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取量会显著下降(P<0.01),达到胰岛素抵抗状态,并可在48 h内保持稳定。4.7个化合物干预IR-3T3-L1脂肪细胞,测定细胞的糖摄取能力、IL-6含量,Western blot法测定PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达。结果表明,7个化合物均可显著提高IR-3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取量(P<0.01)、降低IL-6含量(P<0.01、P<0.05),均可不同程度地提高PI3K/Akt信号通路中p-Akt/Akt的含量,降低IKKβ及p-NF-?Bp65/NF-?Bp65的含量(P<0.01、P<0.05)。表明矮生二裂委陵菜化合物可能是通过调节胰岛素信号通路PI3K/Akt中的p-Akt/Akt、IKKβ、p-NF-?Bp65/NF-?Bp65等蛋白表达来提高胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取量、降低IL-6的含量,进一步达到改善胰岛素抵抗的目的。研究表明,矮生二裂委陵菜化合物具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,抑制剂类型主要为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制,能不同程度地抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,还可不同程度地提高胰岛素抵抗状态下细胞的糖摄取能力,降低IL-6含量,其可能是通过调节胰岛素信号通路PI3K-Akt中Akt、IKKβ、NF-?Bp65等相关蛋白的表达来实现的。
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