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本论文针对清开灵注射液中氨基酸、肽类成分及大分子蛋白进行研究,建立了清开灵注射液中20种氨基酸的含量测定方法及其指纹图谱,针对清开灵注射液中未除尽的大分子蛋白建立了检测方法,完善了清开灵注射液的质量标准,对清开灵注射液的质量控制水平的提高具有重要意义。论文主要内容及结果如下：1建立清开灵注射液中氨基酸的含量测定方法本研究分别采用邻苯二甲醛、9-芴甲基氯甲酸酯(OPA-FMOC)、异硫氰酸苯酯(PITC)衍生化试剂,进行清开灵注射液中氨基酸的衍生化反应,应用HPLC-DAD进行含量测定,通过比较不同衍生化方法的方法学考察结果,最终确定采用PITC柱前离线衍生化进行清开灵注射液中氨基酸测定,建立了同时测定清开灵注射液中20种氨基酸含量的方法。通过分析多厂家、多批次注射液中20种氨基酸的含量测定结果,根据色谱峰分离度、在所测清开灵注射液样品中共有性以及含量多少,最终确定占总氨基酸95%以上的14种氨基酸,包括Glu、Gly、Ala、Pro、Leu、Asp、Ser、Arg、Val、Phe、Orn、Tyr、 He、Lys,作为清开灵注射液中评价总氨基酸含量的指标成分。2“一标多测”法测定清开灵注射液中氨基酸的含量在建立了准确测定清开灵注射液中14种氨基酸含量的基础上,通过对内参物的筛选及耐用性的考察,最终建立了以甘氨酸作为内标物,以斜率校正方法计算相对校正因子的清开灵注射液中14种氨基酸“一标多测”的方法,与经典的工作曲线法相比,相对误差在0.08%～2.44%之间,说明该方法可用于清开灵注射液中氨基酸的质量评价。3清开灵注射液中氨基酸类成分指纹图谱的建立通过采用PITC柱前离线衍生化法对多厂家、多批次清开灵注射液水解前后所含的氨基酸类成分的测定,最终建立氨基酸类成分的指纹图谱,其相似度结果均在0.90以上4清开灵注射液中大分子蛋白的检测及鉴定本研究利用丙酮沉淀蛋白法,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对清开灵注射液中多肽及蛋白类成分进行检测,对某药厂生产的不同批次清开灵注射液的检测,通过对蛋白条带的酶解及质谱鉴定,表明清开灵注射液成品中不同程度地均含有大分子蛋白,通过检索NCBInr数据库,初步发现清开灵注射液中存在以下两种残留蛋白(存在于牛种属)：胶原蛋白(138854Da)和酪蛋白(24420Da)。