论文部分内容阅读
目的：⑴通过观察去势骨质疏松模型小鼠体内Treg细胞数量及功能变化，探讨Treg与绝经后骨质疏松症的关系。⑵通过给予去势小鼠罗盖全(1，25(OH)2D3)，检测模型小鼠体内Treg细胞数量及功能变化，探讨1，25(OH)2D3抗骨质疏松症作用是否与其调节Treg有关。
方法：50只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为5组，每组10只。第1组基础组(BAS)不用药，在实验开始即处死;第2组假手术组(SHAM)术中没有进行卵巢切除，术后每日给予生理盐水10ml/kg灌胃:第3～5组进行双侧卵巢切除，第3组去卵巢模型对照组(OVX)术后每日灌胃给予生理盐水10ml/kg;第4组药物干预组(OVX+1，25(OH)2D3)术后每日灌胃给予罗盖全0.1ug/(kg.day);第5组阳性药物已烯雌酚对照组(OVX+DES)术后每日灌胃给予阳性药物己烯雌酚0.1mg/(kg.day)。动物于给药90天后处死，取脾脏、胫骨、股骨进行后续实验。小鼠脾脏分两部分，一部分应用流式细胞术检测Treg细胞数量变化，另一部分应用实时荧光定量RT-PCR技术检测Foxp3基因表达情况。股骨经EDTA脱钙石蜡包埋应用免疫组化技术检测Foxp3蛋白表达情况。取胫骨进行骨形态计量学分析。最后，采用SPSS16.0软件对各组小鼠体内Treg细胞数量变化及Foxp3基因蛋白表达与骨形态计量学参数进行相关性分析。
结果：①小鼠胫骨骨形态计量学测量:与SHAM组相比，OVX组骨小梁面积百分数(％Tb.Ar)，骨小梁厚度(Tb.Th)，骨小梁数目(Tb.N)显著下降(P＜0.01)，骨小梁分离度(Tb.Sp)，每毫米破骨细胞数目(Oc.N)均显著增加(P＜0.01)。与OVX组相比，DES组％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N显著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、Oc.N显著减少(P＜0.01)。与OV×组相比，1，25(OH)2D3组％Tb.Ar、Tb.Th、Tb.N显著增加(P＜0.01)，Tb.Sp、 Oc.N显著减少(P＜0.01)。与SHAM组相比，OVX组骨小粱面积、厚度和数量都明显减少，骨小粱间隙增宽，提示OVX组在去卵巢90d后发生了明显的骨质疏松。与OVX组相比，DES组和1，25(OH)2D3组骨小粱面积、数量有明显增加，间隙变窄，提示DES及1，25(OH)2D3均可有效预防去卵巢后骨丢失。②小鼠脾脏Treg细胞数量变化:与SHAM组比较，OVX组小鼠体内Treg数量明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，DES组，1，25(OH)2D3组略低于SHAM组，但差异无统计学意义(P＞0.05);与OVX组比较，SHAM组、DES组、1，25(OH)2D3组小鼠体内Treg数量明显高于OVX组，差异有统计学意义(P＜0.05)。③小鼠脾脏Foxp3基因表达:与SHAM组比较，OVX组、DES组、1，25(OH)2D3组小鼠体内Foxp3基因表达明显降低，差异有统计学意义(P＜0.01);与OVX组比较，1，25(OH)2D3组和DES组Foxp3基因高表达，差异具有统计学意义(P＜0.01)。④小鼠股骨Foxp3蛋白表达:OVX组与其他各组比较，低表达Foxp3蛋白，差异有统计学意义(P＜0.01)。⑤相关性分析:骨组织形态计量学参数与小鼠脾脏Treg细胞比例、Foxp3基因表达进行相关性分析，结果表明它们之间存在显著性相关。
结论：⑴Treg细胞数量下降参与了去势小鼠的骨丢失。⑵1，25(OH)2D3抗骨质疏松症作用可能与其增加Treg数量有关。