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背景
白介素-33(IL-33)是IL-1家族的一名重要成员，在生理情况下定位于核内作为转录因子发挥作用，而在细胞受损时作为警报素被动释放，以细胞因子形式分泌至胞外参与免疫应答。IL-33在各种上皮细胞及内皮细胞中表达，多种炎症性疾病与IL-33密切相关，且有临床研究表明炎症性肠病(IBD)患者结肠组织中IL-33表达增高，提示IL-33可能参与对IBD的免疫调节，但其具体作用机制尚未完全明确。
目的
检测DSS诱导的小鼠实验性肠炎模型中结肠组织IL-33表达的变化，探究在实验性肠炎模型中IL-33基因敲除对肠炎发展的影响及其具体机制。
方法
1.DSS诱导的实验性肠炎模型的制备：模型制备当天记为第0天，配制3%DSS溶液饲喂C57BL/6背景的野生型小鼠(WT)及IL-33基因敲除小鼠(IL-33-/-)以诱导肠炎的发生，在第2天和第4天更换新鲜的DSS溶液，在第6天脱颈椎处死小鼠并收集样本，诱导模型期间每天固定时间称量小鼠体重并记录小鼠基本情况；
2.免疫组化及RT-PCR检测野生型小鼠在饲喂3%DSS溶液前后结肠组织中IL-33的蛋白水平和mRNA水平的表达变化；
3.取出小鼠结肠组织进行大体观察及长度的测量，环切固定后进行HE染色及病理学评分、Ki67免疫组化染色和TUNEL荧光检测；
4.流式细胞术检测肠系膜淋巴结中ILC2及其分泌相关细胞因子的比例、Th细胞亚群及IL-17+γδT细胞的数量变化；
5.ELISA及RT-PCR检测结肠组织中与Th17细胞及IL-17+γδT细胞生成相关的炎性细胞因子表达水平；
6.流式细胞术检测肠系膜淋巴结中DC分泌IL-6的情况。
结果
1.DSS诱导的实验性肠炎模型建立成功，小鼠体重出现明显下降并伴稀便、血便；
2.结肠组织免疫组化及mRNA检测均显示饲喂3%DSS溶液的野生型实验组小鼠中IL-33的表达较野生型对照组小鼠明显升高；
3.IL-33-/-及WT实验组小鼠结肠较正常对照组小鼠均有明显缩短变形，但IL-33-/-实验组小鼠结肠缩短程度及病理学评分较WT实验组小鼠低。免疫组化及TUNEL荧光检测发现IL-33-/-实验组小鼠较WT实验组小鼠的Ki67表达增多、TUNEL荧光阳性细胞数量明显减少；
4.流式细胞术检测发现，与WT实验组小鼠相比，IL-33-/-实验组小鼠肠系膜淋巴结中的ILC2细胞比例及ILC2细胞分泌IL-4、IL-5显著减少，Th17细胞及IL-17+γδT细胞比例显著降低，Th1和Th2细胞比例无统计学差异；
5.ELISA检测结肠炎性细胞因子发现IL-33-/-及WT实验组小鼠间TNF-α的表达无统计学差异，而IL-33-/-实验组小鼠IL-6的表达水平较WT实验组小鼠显著降低。RT-PCR检测炎性细胞因子发现IL-33-/-实验组小鼠IL-6及IL-1β的表达水平较WT实验组小鼠均明显降低；
6.流式细胞术检测发现，IL-33-/-实验组小鼠肠系膜淋巴结中DC分泌IL-6的水平较WT实验组小鼠明显下降。
结论
1.DSS诱导的小鼠实验性肠炎模型中结肠组织IL-33表达明显增高；
2.IL-33基因敲除可明显减轻DSS诱导的小鼠实验性肠炎；
3.IL-33基因敲除可减轻DSS所致肠炎中肠上皮细胞增殖能力的受损程度，抑制肠上皮细胞的凋亡；
4.IL-33基因敲除导致DSS所致肠炎中ILC2细胞显著减少及分泌IL-4、IL-5的能力明显降低；
5.在DSS诱导的实验性肠炎模型中，IL-33基因敲除引起DC分泌IL-6明显减少，从而显著抑制Th17细胞及IL-17+γδT细胞的分化。
白介素-33(IL-33)是IL-1家族的一名重要成员，在生理情况下定位于核内作为转录因子发挥作用，而在细胞受损时作为警报素被动释放，以细胞因子形式分泌至胞外参与免疫应答。IL-33在各种上皮细胞及内皮细胞中表达，多种炎症性疾病与IL-33密切相关，且有临床研究表明炎症性肠病(IBD)患者结肠组织中IL-33表达增高，提示IL-33可能参与对IBD的免疫调节，但其具体作用机制尚未完全明确。
目的
检测DSS诱导的小鼠实验性肠炎模型中结肠组织IL-33表达的变化，探究在实验性肠炎模型中IL-33基因敲除对肠炎发展的影响及其具体机制。
方法
1.DSS诱导的实验性肠炎模型的制备：模型制备当天记为第0天，配制3%DSS溶液饲喂C57BL/6背景的野生型小鼠(WT)及IL-33基因敲除小鼠(IL-33-/-)以诱导肠炎的发生，在第2天和第4天更换新鲜的DSS溶液，在第6天脱颈椎处死小鼠并收集样本，诱导模型期间每天固定时间称量小鼠体重并记录小鼠基本情况；
2.免疫组化及RT-PCR检测野生型小鼠在饲喂3%DSS溶液前后结肠组织中IL-33的蛋白水平和mRNA水平的表达变化；
3.取出小鼠结肠组织进行大体观察及长度的测量，环切固定后进行HE染色及病理学评分、Ki67免疫组化染色和TUNEL荧光检测；
4.流式细胞术检测肠系膜淋巴结中ILC2及其分泌相关细胞因子的比例、Th细胞亚群及IL-17+γδT细胞的数量变化；
5.ELISA及RT-PCR检测结肠组织中与Th17细胞及IL-17+γδT细胞生成相关的炎性细胞因子表达水平；
6.流式细胞术检测肠系膜淋巴结中DC分泌IL-6的情况。
结果
1.DSS诱导的实验性肠炎模型建立成功，小鼠体重出现明显下降并伴稀便、血便；
2.结肠组织免疫组化及mRNA检测均显示饲喂3%DSS溶液的野生型实验组小鼠中IL-33的表达较野生型对照组小鼠明显升高；
3.IL-33-/-及WT实验组小鼠结肠较正常对照组小鼠均有明显缩短变形，但IL-33-/-实验组小鼠结肠缩短程度及病理学评分较WT实验组小鼠低。免疫组化及TUNEL荧光检测发现IL-33-/-实验组小鼠较WT实验组小鼠的Ki67表达增多、TUNEL荧光阳性细胞数量明显减少；
4.流式细胞术检测发现，与WT实验组小鼠相比，IL-33-/-实验组小鼠肠系膜淋巴结中的ILC2细胞比例及ILC2细胞分泌IL-4、IL-5显著减少，Th17细胞及IL-17+γδT细胞比例显著降低，Th1和Th2细胞比例无统计学差异；
5.ELISA检测结肠炎性细胞因子发现IL-33-/-及WT实验组小鼠间TNF-α的表达无统计学差异，而IL-33-/-实验组小鼠IL-6的表达水平较WT实验组小鼠显著降低。RT-PCR检测炎性细胞因子发现IL-33-/-实验组小鼠IL-6及IL-1β的表达水平较WT实验组小鼠均明显降低；
6.流式细胞术检测发现，IL-33-/-实验组小鼠肠系膜淋巴结中DC分泌IL-6的水平较WT实验组小鼠明显下降。
结论
1.DSS诱导的小鼠实验性肠炎模型中结肠组织IL-33表达明显增高；
2.IL-33基因敲除可明显减轻DSS诱导的小鼠实验性肠炎；
3.IL-33基因敲除可减轻DSS所致肠炎中肠上皮细胞增殖能力的受损程度，抑制肠上皮细胞的凋亡；
4.IL-33基因敲除导致DSS所致肠炎中ILC2细胞显著减少及分泌IL-4、IL-5的能力明显降低；
5.在DSS诱导的实验性肠炎模型中，IL-33基因敲除引起DC分泌IL-6明显减少，从而显著抑制Th17细胞及IL-17+γδT细胞的分化。