【摘 要】
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本论文通过可培养方法从库姆塔格沙漠土壤样品获得菌株,依据平板上菌落形态的不同进行菌株的分离纯化及16S r DNA序列测定,并对菌株进行种属鉴定及种群多样性分析。然后从分
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本论文通过可培养方法从库姆塔格沙漠土壤样品获得菌株,依据平板上菌落形态的不同进行菌株的分离纯化及16S r DNA序列测定,并对菌株进行种属鉴定及种群多样性分析。然后从分离保存的菌株中,通过平板对峙法和平板扩散法筛选得到一株对建兰炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)具有较高拮抗活性的菌株N147-1-3,并对菌株进行16Sr DNA序列分析和生理生化试验鉴定,最后对抑菌物质进行初步探索,并对性质做了分析。研究结果如下:利用两种培养基(R2A、1/4R2A)对从库姆塔格沙漠的9份土壤样品进行分离菌株,共得到190株菌株。菌株主要分布在在厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria),经统计该沙漠区域内分离的菌株共有30个属,57种,其中芽孢杆菌有119株,占总菌株数的63%,为该沙漠区域的优势种。潜在的新种有22株,经与Ez Bio Cloud网站数据已知序列的相似性相比在97.5%以下,占总菌株的11%,有待进一步研究。对R2A培养基和1/4R2A培养基分离的菌株的种群多样性的四个参数为:R2A:物种丰富度(S)为12.37±56.55、优势度指数(D)为0.2913±0.0536、Shannon-Wiener(H)为1.3262±0.3612、均匀度指数(E)为0.6034±0.0312。1/4R2A:物种丰富度(S)为10.62±41.41、优势度指数(D)为0.3566±0.0544、Shannon-Wiener(H)为1.3025±0.3576、均匀度指数(E)为0.6066±0.0476。从分离保存的菌株中筛选得到一株对建兰炭疽病菌有较高活性的菌株N147-1-3,经16S r DNA序列分析和生理生化试验结果,将菌株鉴定为甲基营养性芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。菌株抑菌物质的摇瓶发酵条件优化结果为:5.0%蔗糖,2.0%Na NO3,0.05%Ca Cl2和0.3%KNO3,p H 7.0,发酵时间为48 h,接种量为5.0%,装液量为250 m L三角瓶装有125 m L培养液。拮抗菌株的粗蛋白经60%的硫酸铵沉淀后具有最高的抑菌活性,经氯仿抽提后不具有拮抗活性;经高温处理和蛋白酶K作用后,抑菌物质的拮抗作用消失,初步分析该抑菌物质是蛋白类物质。抑菌物质对温度比较敏感,随着温度的升高,活性逐渐降低;在p H 6.0时活性达到最大值;对金属离子的依赖性不强。
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