【摘 要】
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3-羟基丙酸(3-Hydroxypropionic acid 或 3-Hydroxypropanoate)简称3-HP,是一个重要的平台化合物。3-HP具有的羧基和羟基使之具有双功能性,成为有机合成的通用试剂。3-HP自身
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3-羟基丙酸(3-Hydroxypropionic acid 或 3-Hydroxypropanoate)简称3-HP,是一个重要的平台化合物。3-HP具有的羧基和羟基使之具有双功能性,成为有机合成的通用试剂。3-HP自身聚合生成的聚合物聚(3-HP)具有很好的生物相容性和生物降解性,可以用来生产外科产品和药物缓释材料。3-HP的生产方法有化学法,野生微生物发酵法和生物代谢途径生产法。本研究旨在构建重组大肠杆菌利用葡萄糖生产3-HP。成功克隆了从琥珀酸到3-HP途径中的酶,琥珀酰辅酶A合成酶(SucCD),甲基丙二酰辅酶A变位酶(ScpA),甲基丙二酰辅酶A异构酶(MMCE),甲基丙二酰辅酶A脱羧酶(ScpB),丙烯酰辅酶A还原酶(AcuI),酰基辅酶A脱氢酶(ACD),烯酰辅酶A水合酶(PaaF),烯酰辅酶A水合酶(ECH),3-羟基异丁酰辅酶A水解酶(HIBCH)。并利用酿酒酵母体内同源重组体系和重组试剂盒体外同源重组这两种方法分别构建了E. coli BL21(pYES2-SSMSAEH)和E. coli BL21(pET-28a-ASSSPH)两株重组菌,对其进行发酵研究,但无3-HP合成。进一步利用无细胞合成研究代谢途径,结果显示丙烯酰辅酶A还原酶催化的反应是不能顺利进行,推测该酶的活性不高可能是导致无产物生成的主要原因。
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