DNA分子是遗传的主要物质,能够储存足够量的遗传信息,并且在维持基因组稳定性和完整性方面发挥着核心作用。外在因素和内在因素会导致DNA发生损伤。如果DNA损伤没有得到适当修复,它们会转化为永久性突变,从而显著增加患癌症的风险,或导致细胞衰老或死亡。为了应对DNA损伤,真核细胞进化出一系列的应答机制,即DNA损伤应答（DNA-damage response,DDR）,以便快速识别损坏部位,允许DNA损伤修复因子的募集,进而协调不同的细胞过程,如DNA修复、细胞衰老和细胞凋亡。DNA双链断裂（DNA-double-strand breaks,DSBs）是后果最严重的DNA损伤形式,外源性因素或在正常的生理过程都可能发生。未修复的DSBs具有危险的后果,如诱导基因组不稳定性和促进细胞凋亡或肿瘤发生。修复DSBs的两条经典的途径是同源重组（Homologous re-combination,HR）修复和非同源末端连接（nohomologous end-joining,NHEJ）修复。RNF8是DNA损伤应答重要的蛋白,也是一种E3泛素连接酶。RNF8在HR和NHEJ修复途径中的上游起着核心的调节作用,通过对组蛋白的泛素化修饰募集下游的损伤修复蛋白进而促进DNA损伤修复。p53是维持基因组稳定性的重要蛋白,是人体重要的抗癌基因之一。在正常情况下,细胞内p53含量较低。当DNA损伤发生时,p53则会被活化,进入到细胞核中,参与调控相关基因的转录并参与下游的事件,如生长停滞、DNA修复、凋亡、衰老等。RNF8和p53在DNA损伤修复中都起着重要的作用,那么它们在参与DSB损伤修复的过程中有着什么联系呢?在本研究中,我们采用依托泊苷（Etoposide,ETO）作为DNA损伤药物,诱导细胞产生DNA双链断裂损伤,研究了RNF8对p53功能的影响。我们发现RNF8低表达的细胞存活率降低,同时细胞凋亡率增加,这意味着RNF8的缺失使DNA损伤修复受到了抑制。但是,RNF8低表达却促进了p53的蛋白水平增加。RNF8低表达且p53缺失的细胞存活率增加,细胞凋亡现象降低,这说明RNF8低表达的细胞对ETO敏感性增强可能是由p53蛋白的上调导致的。接下来我们利用DR-GFP-U2OS和EJ5-GFP-U2OS两种报告系统,流式细胞术检测了RNF8和p53对DSB损伤的HR和NHEJ修复效率的影响。结果显示,RNF8能通过调节p53的功能进而促进DSB修复。RNF8能促进高效的DNA损伤修复,p53持续激活会促进细胞的凋亡。为了探究RNF8是如何调控p53的凋亡诱导功能的,我们进行了质谱分析及免疫共沉淀和GST-Pull Down实验,结果发现RNF8和p53存在于同一复合物中。Western Blot和Real-time PCR实验发现,RNF8作为E3泛素连接酶并不介导p53的泛素化降解,但是却调节p53的m RNA的水平。双荧光素酶报告基因实验发现,RNF8正常表达会抑制p53的转录水平并促进DSB损伤修复。综上所述,我们认为RNF8可能通过抑制p53的表达水平从而调控了p53的凋亡诱导功能。本研究初步探究了RNF8促进DSB修复的另一条路径,即RNF8可能通过抑制p53的凋亡诱导功能促进DSB修复,这为进一步揭示RNF8和p53在DSB修复中的作用以及相互作用调节机制奠定了基础。