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目的：检测人类消化道肿瘤组织中PH-20mRNA基因表达水平，构建转基因质粒并进行相应的功能学研究，揭示该基因与肿瘤转移的关系。
方法：用半定量RT-PCR方法检测围手术期肿瘤患者原发灶、癌旁正常组织及淋巴转移癌的PH-20mRNA基因表达水平，明确该基因的表达水平与临床病理因素的关系及意义。从原核质粒中将PH-20基因亚克隆至真核表达质粒中，酶切鉴定后，脂质体转染法稳定转染293细胞，G418筛选后，半定量RT-PCR法检测被转染细胞的PH-20基因表达，Westernblot验证蛋白质表达，流式细胞术检测转染细胞周期和细胞凋亡，MTT法检测转染细胞的生长曲线，观察转基因细胞的软琼脂集落形成能力。
结果：通过半定量RT-PCR检测了59例消化道肿瘤患者癌原发灶、癌旁正常组织及淋巴结转移癌的PH-20mRNA基因表达水平，同时检测5例消化道良性病变正常组织及各种细胞株(SGC-7901、BGC823、LS-174-T、HCT8、95-D、A549、HFL、HEPG2、L-02)中PH-20mRNA基因表达水平，发现消化道肿瘤患者中PH-20mRNA的表达在癌原发灶高于癌旁正常组织(P＜0.05)，在淋巴结转移癌的表达更明显增高(P＜0.05)，PH-20mRNA的表达与肿瘤的浸润程度有关，浸润程度越深PH-20mRNA的表达水平越高(P=0.002)。采用基因工程方法将PH-20mRNA从原核表达载体亚克隆至pcDNA3.1-his6真核表达载体中，酶切反应鉴定构建成功。分别以PH-20/pcDNA3.1和pcDNA3.1空载体转染HEK293细胞株，转染后用G418筛选稳定表达株。半定量RT-PCR法检测发现293/PH-20细胞中有PH-20mRNA表达，而293/pcDNA3.1-his6细胞无表达。Westernblot验证293/PH-20高表达PH-20，293/pcDNA3.1-his6不表达PH-20。用MTT法和软琼脂克隆实验检测表达产物的生物学活性，发现转入PH-20基因后细胞的生长速率比对照组明显加快(P＜0.05)，细胞软琼脂形成集落能力提高，其克隆的形成率增加31％。此外，形成的集落明显大于对照细胞。流式细胞术分析结果显示，S期细胞占的比例由22.4％增加到63.2％，这表明PH-20对细胞的增殖有较强的促进作用。
结论：PH-20可能使HEK293细胞株细胞的恶性度加大，并促进其生长。PH-20在消化道肿瘤原发灶、转移灶及癌旁正常组织均有表达，并且其表达与消化道肿瘤细胞恶性度成正比。将PH-20基因体外导入HEK293细胞株可以明显增加PH-20蛋白表达，促进细胞的生长及增殖能力。