表面分子印迹技术在生物分子色谱分离中的应用

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本论文利用表面分子印迹技术水相中分别印迹了色氨酸和溶菌酶,考察了它们的色谱分离特性。具体来讲,本论文的工作包括以下三个方面: 一、综述了分子印迹技术的基本理论,分子印迹色谱固定相研究进展及蛋白质分子印迹的研究现状及发展前景。 二、水相中合成了一种新型的分子印迹聚合物,用来选择性识别色氨酸(Trp)。实验中采用表面分子印迹的方法,以功能化的硅球(F-silica-gel)为载体,制备了以L-Trp或者D-Trp为模板分子的分子印迹微球。首先用制备好的分子印迹微球对模板分子及其相似物进行了吸附实验。然后进一步将其装填色谱柱,用高效液相色谱考察其色谱分离能力。结果表明,印迹色谱柱在水相流动相的条件下不但成功地分离了色氨酸及其芳香族氨基酸相似物,而且还可以分离色氨酸的对映异构体。本方法为手性氨基酸分离和纯化提供了一条新思路。 三、采用表面活性自由基聚合法(SIP)在水相中成功制备了溶菌酶(Lysozyme)分子印迹微球(MIP beads)。通过上述方法得到的印迹微球有很好的孔分布并且没有溶液聚合副产物,与传统方法合成的不规则印迹微球相比有更好的特性。我们用红外光谱、元素分析、氮气吸附和扫描电镜对分子印迹微球进行了表征。同时还将溶菌酶分子印迹微球(Lysozyme-MIP beads)填装色谱柱,溶菌酶印迹柱能使模板蛋白(Lysozyme)与其竞争蛋白牛血红白蛋白(BHb)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(Ovalbumin)或细胞色素C(Cyt C)得到分离。
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