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一、沙棘籽渣黄酮类化合物对人肿瘤细胞凋亡的影响 1.沙棘籽渣黄酮类化合物对人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的影响 目的:研究沙棘籽渣黄酮类化合物(flavonoids from seed residue of Hippophae rhamnoides L.,FHR)对人乳腺癌细胞Bcap-37生长抑制和细胞凋亡的诱导效应。为进一步研究FHR抑癌和诱导肿瘤细胞凋亡的机理提供实验依据。方法:将不同浓度的FHR作用于人乳腺癌Bcap-37细胞,若干时间后,分别采用MTT法、Wright染色法、透射电镜观察超微结构、原位末端标记法(TUNEL)及流式细胞术,研究FHR对Bcap-37细胞的生长抑制和细胞凋亡的诱导效应。结果:FHR在10~1000 μg/mL等浓度范围内可以诱导人乳腺癌细胞Bcap-37产生生长抑制和细胞凋亡的特征性变化。MTT比色法研究发现,FHR在200 gg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL的浓度下,细胞生长均受到不同程度的抑制,这一抑制作用随FHR浓度的升高而增强。并且浓度与生长抑制率(Inhibitory rate)呈现明显的依赖效应,1000μ/mL实验组抑制率达75.1%;Wright染色结果显示,Bcap-37经FHR作用后细胞逐渐变圆,体积缩小,胞浆浓缩,胞核着色较深且固缩碎裂,折光性增强,胞膜表面有芽状突起(凋亡前期状态),显示出典型的凋亡症状和趋势;透射电镜结果发现,经FHR为500μg/mL、200 μg/mL和100 μ/mL作用的Bcap-37细胞,细胞核缩小,其形态扭曲并出现中文摘要断裂,且结构不完整,呈碎裂状,染色质凝集成不规则团簇,核仁消失,细胞浆普遍出现空泡,对照组核膜与细胞膜仍保持完整,核内染色质分布均匀;TUNEL结果发现,随着FHR浓度(100陀/mL,200林g/mL,500林g/mL)的增加,Bcap一37细胞的胞核区域的荧光强度逐渐加强,在500陀/mL组,绿色荧光分布于整个细胞,且细胞形态呈葡萄串状,同时细胞结构趋显萎缩。阴性对照组Bcap一37细胞,几乎无荧光显示,或呈现微弱的亮度。而阳性对照组Bc即一37细胞的细胞核在整个视野中有强烈的绿色荧光;流式细胞术结果显示,FHR浓度为1000林g/mL,作用一Be即一37细胞24h、48h和72h后,可使Bc即一37细胞的细胞周期受阻于GO/GI和GZ从期,并诱导其发生细胞凋亡,此外,FHR实验组在作用24h,48和72h后其凋亡指数比相应时间段对照组显著升高。结论:体外检测表明,FHR对人乳腺癌细胞BcaP一37具有诱导细胞凋亡的效应。