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目的:胃癌是源于胃粘膜上皮的恶性肿瘤,发病率及死亡率均很高。中国是胃癌高发的国家,发病率及死亡率均高于世界平均水平。虽然目前采取了包括手术、放疗、化疗及生物治疗等综合性治疗,但治疗的效果仍不十分理想,五年总生存低下。胃癌的发生有多种癌基因及抑癌基因的参与,揭示这些基因的变化规律,有助于阐明胃癌的发病机制,还能协助肿瘤的治疗及预后。随着近几年对胃癌研究的深入,人们逐渐意识到胃癌发生的机制比想象的更加复杂。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的长约21-25nt的非编码单链RNA。研究发现,细胞的所有生物学过程几乎都有miRNA参与,包括细胞的发育、增殖、凋亡等。miRNA在肿瘤的发生发展中可能发挥着致癌或抑癌的作用。目前miRNA与肿瘤的关系逐渐受到重视,但其与胃癌的关系尚不明确。本研究通过Real-timePCR技术检测miRNA-200a在胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,探讨其表达情况与临床病理因素间的相关性。并利用生物信息学方法探索miRNA-200a的相关靶基因。从而为阐明miR-200a在胃癌发生及发展中的作用机制提供理论依据。
方法:
1收集2011年3月至6月于我院外科手术的,27例胃癌组织标本及癌旁正常组织标本。运用定量Real-timePCR方法检测miRNA-200a在胃癌组织及癌旁正常胃组织中的表达情况。采用配对t检验分析miRNA-200a的表达在胃癌组织癌旁组织中的差异。
2收集标本的临床病理资料,包括性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、Borrmann分型和组织学分化程度等,然后采用单因素方差分析的统计学方法分析miRNA-200a在胃癌组织中的表达水平与胃癌临床病理特征间的相关性。
3应用生物信息学软件PicTar、MiRanda和TargetScan对miRNA-200a的靶基因进行预测,筛选共同的靶基因。基于GeneOntology数据库,对共同的靶基因进行GO分类,并对其进行显著性筛选,进一步缩小靶基因的范围。
结果:
1Real-timePCR技术检测27对胃癌及其癌旁正常组织miRNA-200a的相对表达量,结果显示22例(81%)miRNA-200a在癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织,5例(29%)高于癌旁正常组织。在胃癌组织中相对表达量RQ值为0.33-0.01,对应癌旁正常组织为0.78±0.15,结果显示miRNA-200a在胃癌组织中表达显著下调,有统计学意义(P<0.05)。
2miRNA-200a的表达水平与脉管瘤栓存在相关性(P<0.05)。与性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、Borrmann分型和组织学分化程度等各临床病理参数间均无显著相关性(P>0.05)。
3运用生物信息学软件PicTar、MiRanda和TargetScan分析,预选出miRNA-200a靶基因的数目分别为430个、7645个和363个。发现交集靶基因共38个,包括KHDRBS2、GNB1、HMGB1、NOVA1、PAFAH1B1、PELI1等。基于GeneOntology数据库,对共同的靶基因进行GO分类,并对其进行显著性筛选,提示部分靶基因参与信号的转导、蛋白质磷酸化、细胞增殖、迁移、凋亡等生物学过程。
结论:
1MiRNA-200a在胃癌组织中表达呈显著下调,显著低于癌旁正常组织中的表达。
2MiRNA-200a的表达与脉管瘤栓存在相关性。提示miRNA-200a可能与胃癌的浸润、转移具有相关性。
3通过生物信息学分析提示miRNA-200a结合并调控靶基因表达,参与信号的转导、蛋白质磷酸化、细胞增殖、迁移、凋亡等生物学过程。但还需进一步研究验证。