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用固相化的纯化狂犬病毒抗原包被ELISA板,对英国MRC惠赠的噬菌体半合成人ScFv抗体库进行了三轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选,从第三轮洗脱下来的克隆中获得四株表达特异性结合狂犬病毒抗原的人单链抗体(ScFv)的噬菌体A12、A8、B5、B9.ELISA结果表明,上述四株噬菌体抗体与狂犬病毒抗原有特异性反应,而与HBsAg、胰酶(Tripsin)、人IgG、BSA、Vero细胞上清等无关抗原无反应.从噬菌体感染菌株中提取噬粒进行了PCR及基因序列测定.PCR结果证实噬粒中含有与预计ScFv片段大小一致的基因片段(约900bp).基因序列测定结果表明,所获基因为ScFv基因,具有典型的VH-(GGGGS)<,3>-VL结构.A12经IPTG诱导后有可溶性表达,而A8则不能表达出可溶性scFv抗体片段.SDS-PAGE显示,A12在经IPTG诱导后在约30KD处有一表达产物,大小与预计相符.表达量占总菌体超声后上清量的10.2﹪.Western blot显示经诱导的A12scFv表达产物与抗C-myc抗体在约30KD处有一强阳性表达带.用狂犬病毒抗原作抗原,A12scFv作抗体进行Western blot,未出现条带,表明A12scFv所针对的是空间结构抗原位点.采用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)及小鼠中和实验测定了A12scFv对狂犬病毒的中和活性,RFFIT结果表明,A12 ScFv在1:27稀释时能完全中和病毒.而针对BSA的13CG2 scFv在1:3时不能中和病毒.小鼠体内中和实验表明,A12样品组小鼠共存活9只,而阴性对照组小鼠全部死亡,两者存在显著差异;A12scFv对狂犬病毒的中和指数为1096,中和效价为2.86IU/ml.表明具有中和活性;A12scFv在729倍稀释时能100﹪保护小鼠抵抗致死量狂犬病毒的脑内攻击,表明其有希望作为抗体药物代替目前使用的马抗狂犬病毒血清(ERIG)或人抗狂犬病毒特异性免疫球蛋白(HRIG)应用于暴露后狂犬病的预防.采用蛋白A亲和层析的方法对A12scFv可溶性表达产物进行了纯化,SDS-PAGE结果显示纯化后产物为一条带,扫描结果表明纯度达90.8﹪.稳定性试验表明,A12scFv超声后上清及其纯化后产物经4℃4星期和37℃3天放置后ELISA效价无明显下降.