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目的:建立离体大鼠结肠平滑肌细胞分离、纯化、原代培养及鉴定的方法,在细胞水平研究东北鹤虱药物血清的平滑肌松弛作用机制。 方法:1.采用混合酶法即胰蛋白酶消化杂细胞,胶原酶Ⅱ消化平滑肌细胞,分次消化、分次收集细胞,配合机械法吹打、过细胞筛得到细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM液培养细胞,通过台盼兰染色法检查细胞数量及存活率,差速贴壁法纯化细胞,原代培养的细胞绘制生长曲线。2.新分离平滑肌组织常规甲醛固定、石蜡包埋、HE染色鉴定组织纯度,免疫组织化学ABC法用特异性平滑肌肌动蛋白α-actin鉴定原代培养细胞。3.分别用东北鹤虱水提醇沉溶液5g/mL、10g/mL、15g/mL给大鼠灌胃,每天一次,连续7天,末次灌胃后2小时下腔静脉取全血,离心后取上清液（含药血清）,用MTT比色法测定含药血清对结肠平滑肌细胞增殖的影响,通过细胞培养液的LDH检测含药血清的细胞毒性,测微尺测量给药前后细胞长度,计算舒张百分数,应用Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM测定结肠平滑肌细胞内游离Ca2+浓度。 结果:成功分离出大鼠结肠平滑肌细胞,存活率>95%,新分离的细胞呈椭圆形或梭形,胞核位于中央。含10%胎牛血清的DMEM培养36小时后细胞贴壁,细胞生长呈明显的迟滞期（第0-3天）,对数期（第3-7天）和平台期（第7-10天）,第十天左右融合成单层。平滑肌条病理切片镜下见细胞呈红色梭形,排列整齐,胞浆丰富,胞核呈紫蓝色,雪茄烟状。免疫组化见细胞呈梭形或多角形,胞浆内棕色及浅棕色细颗粒,核呈浅蓝色,为阳性反应,显示培养的CSM细胞纯度较高。含药血清（10倍稀释）作用于细胞后MTT测定显示与空白对照组比较,低浓度LEG组对细胞有明显的促进增殖作用（P<0.01）,而中、高浓度组与空白对照组无显著性差异。细胞培养液的LDH检测结果显示低浓度组