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cAMP响应元件(CRE)及其结合蛋白(CREB)在G蛋白偶联受体信号通路中发挥着至关重要的作用,影响着精子发生、记忆形成以及生物节律等多项生理功能。PKA对CREB的133位丝氨酸的磷酸化修饰,使得CREB可以招募CBP/p300等辅激活子以及通用的转录因子,通过RNA聚合酶Ⅱ组建转录起始复合体,增强CRE驱动的下游基因的转录。CRE元件驱动报告基因表达已经成为常用的cAMP检测方法,但是哺乳动物细胞中常用的pCRE-luc载体在昆虫细胞中不能响应cAMP的变化。本文通过启动子替换构建了适合于鳞翅目昆虫细胞的pCRE-luciferase报告基因载体,检测发现Gs隅联的家蚕脂动激素受体(AKHR)和Corazonin受体可以激活CRE驱动的报告基因的表达,但是常用的腺苷酸环化酶激动剂forskloin却未能增强CRE的转录活性。进一步研究发现,胞内钙流变化在CRE激活过程中发挥决定性作用。有趣的是,以PKC特异的抑制剂处理后显著地增强了AKH1激发的CRE驱动的转录,并且PKC的激动剂PMA可以阻断这一效应；而钙调蛋白磷酸酶PP2B的抑制剂却强烈的抑制了CRE驱动的萤光素酶的表达。由此推测昆虫细胞中,PKC组成性的抑制CRE驱动的转录,而PP2B对CREB的去磷酸化是CREB激活转录所必需的。此外,抑制胞外信号调节激酶(ERK)的磷酸化对CRE的转录活性没有显著的影响。顾名思义,Arrestin蛋白的作用是限制受体的活性,这一特性已成为重要的GPCR信号通路及配体筛选研究方法。Arrestin蛋白分视觉相关和非视觉相关两大类。视觉相关Arrestin蛋白主要在视紫红质受体的脱敏过程中发挥作用,而非视觉相关Arrestin蛋白(β-arrestin1/2)作为重要的支架蛋白,分布更为广泛,除了限制激动剂对受体的活化外,还参与受体的内吞、胞外信号调节激酶的活化、RhoA/ROCK通路、白细胞介素和肿瘤坏死因子的合成以及转录因子NF-κB的激活等多个依赖或J依赖于GPCR的信号通路的调控。本文以果蝇非视觉相关△rrestin蛋白一—Kurtz为模板,通过EST序列拼接结合RACE技术克隆了家蚕非视觉相关△rrestion蛋白,参考果蝇的同源蛋白,命名为BmKurtz。序列相似性分析发现,该蛋白具有典型的非视觉相关Arrestin蛋白结构域；荧光定量PCR显示该蛋白在家蚕五龄幼虫的各个组织中均有表达；激动剂激活的AKHR可以招募该蛋白,说明其参与GPCR信号通路的调控;过表达该蛋白也显著的延迟了ERK的磷酸化,这一点与果蝇的Kurtz蛋白也是类似的。本研究利用CRE元件构建了适合于鳞翅目昆虫细胞的GPCR信号通路检测系统,并初步揭示了家蚕CREB激活的调控机制。家蚕非视觉相关Arrestin蛋白——Kurtz的克隆与功能鉴定,使其成为昆虫GPCR信号通路的检测方法的重要补充。