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伪狂犬病(Pseudorabies, PR)又名奥叶兹基氏病(Aujeszky’s Disease, AD)是由疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科中的伪狂犬病毒(PRV或ADV)引起的一种或多种动物感染的急性传染病,怀孕母猪主要表现为流产、死胎等繁殖障碍,仔猪表现为体温升高、呼吸困难、神经症状、流涎、生长停滞、体重下降及高死亡率,成年猪感染症状很轻微。猪是该病毒的主要宿主和传染源,本病给养猪业造成的经济损失仅次于猪瘟和口蹄疫。为了及时、准确地掌握该病在我省流行规律和特点,本研究开展了对陕西省PRV分离鉴定及其主要毒力因子gD、gE基因的克隆和序列分析等工作。应用检测PRV野毒抗体的gE-ELISA方法,检测了陕西省部分地区6个集约化猪场187份血清样本,结果显示野毒抗体平均阳性率为28.76%,其中野毒抗体最高为48.98%,最低为0;在这次调查中,PRV野毒在陕西省猪群中的感染普遍存在。从疑似PR的仔猪内脏及脑组织中分离到的一株PRV,并进行了生物学特性鉴定。用分离毒感染鸡胚可见到典型头盖骨隆起的病变,感染PK-15细胞后产生了典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20h左右。分离株病毒能被PRV Min-A株标准阳性血清中和,其在PK-15细胞上的TCID50为10-7.25/100μL。用感染病毒细胞的上清液接种家兔,出现典型的奇痒症状。以分离病毒的DNA为模板,通过PCR技术扩增出gE基因612bp长的片段。以上鉴定结果表明从该猪场分离到的病毒是PRV,并命名为WG株。参考GenBank中已发表的PRV序列,针对gD、gE基因分别设计了2条特异性引物,提取病毒DNA,优化PCR扩增体系及程序,将鉴定的PRV WG株的gD、gE基因进行扩增,分别扩出长为1203bp和1734bp的特异目的片断;PCR产物纯化回收后,与pMD18-T载体连接,再转化到E.coli DH5α细胞;经Amp+的培养基培养并挑出单克隆菌落;培养后用试剂盒提取质粒,并对其进行酶切和PCR鉴定,筛选阳性克隆的重组质粒进行测序。利用DNAstar软件将测序结果同国内外已发表序列进行同源性比较并绘制基因进化树,推测分离株与参考毒株之间的遗传距离。结果表明,所有PRV毒株之间核苷酸序列同源性均很高,WG株gD基因与已公开发表的PRV-Min-A株、PRV-Ea株、PRV-LA株、PRV-Fa株、SA215、Korea株及美国(BK001744)株的核苷酸同源性在98.7%～99.5%之间,氨基酸推导序列的同源性均在96.8%～98.8%之间;PRV-WG株gE基因与PRV-Min-A株、PRV-Ea株、PRV-LA株、PRV-Sh株、Korea株的核苷酸序列同源性在97.9%～99.5%之间,氨基酸推导序列同源性在95.5%～99.3%之间;国内PRV流行株关系较为密切,同属一个分支;其中,陕西分离株与Min-A株核苷酸和氨基酸同源性最高。本研究丰富了PRV分子流行病学资料,为PRV的诊断及预防奠定了良好的基础。