西瓜根际促生菌株的筛选及抗病促生效果的研究

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植物根际中存在着自由生活在土壤或附生于植物根系的一类可促进植物生长及其对矿质营养的吸收和利用,并能抑制有害微生物的有益菌类。本实验利用稀释涂布平板法,从根圈土壤、根表以及根内分离植物根际细菌。测定分离菌株溶磷、解钾、固氮活性,以及产铁载体、吲哚乙酸(IAA)和1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶的能力。同时采用平板对峙法,筛选具有病原菌抑制作用的细菌菌株,测定其抑制率和抑菌特性。根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析鉴定促生特性和拮抗能力较高菌株的遗传特性,构建16S rDNA基因进化树分析铁载体高产菌株的遗传多样性。结合平皿促生实验和盆栽实验,检测筛选菌株的促生防病效果。利用稀释涂布平板法共分离得到135株菌株。经测定,103株能够在溶磷培养基上生长,106株细菌能够在解钾培养基上生长,103株细菌可以在阿须贝无氮培养基上生长。可在以上三种培养基上同时生长的菌株有95株。135株菌株中共有16株菌株的产吲哚乙酸量在20μg·mL-1以上;41株菌株的铁载体产量达到“+++++”,占所有供试菌株的31%。本实验从135株细菌中得到20株对尖孢镰刀菌西瓜专化型有抑制作用的菌株。其中,14株细菌对0型、1型、2型三个生理小种都具明显的抑制作用。经计算可以看出YGRE3、YGRE24、YGRH7表现出最明显的抑制作用,对尖孢镰刀菌西瓜专化型三个生理小种的抑制率均达到25%以上,菌株YGRH7对三种生理小种的抑制率达到30%以上。本实验提取了以上14株细菌在牛肉膏蛋白胨培养液中的无菌发酵液,只有菌株YGRE24的发酵液表现出对病原菌的抑制效果,其发酵液对尖孢镰刀菌西瓜专化型三个生理小种的抑菌率分别为28.37%、22.86%、17.43%。显微镜下观察到菌株YGRE24对菌丝生长产生明显的抑制作用。实验对16株具有不同抑菌功效的细菌进行了抑菌活性物质检测,发现大部分抑菌菌株具有纤维素酶和蛋白酶活性,只有菌株YGRH7表现出明显的β-葡聚糖酶活性。实验并未检测到筛选菌株的几丁质酶活性,但通过实验发现部分菌株在几丁质培养基上产生了黄绿色素。本实验对大部分促生菌株进行了生理生化鉴定和分子生物学鉴定,根据铁载体高产菌株的16S rDNA基因进化树,在44株铁载体高产菌株中,19株细菌属于假单胞菌属的不同种,8株菌属于芽孢杆菌属的不同种,6株菌与放射根瘤菌(Rhizobium radiobacte)的相似度达100%,4株菌分别分布在节杆菌(Arthrobacter sp.)和库克菌(Kocuria sp.),其他菌株分布在其他相近菌属。从基因进化树可以看出,假单胞菌属和芽孢杆菌属是主要的西瓜根际铁载体高产菌属。同时发现西瓜根际拮抗菌株主要为芽孢杆菌属和假单胞菌属细菌。平皿促生实验显示上述促生菌株对西瓜根茎的生长具有一定的促进作用,盆栽实验表明这些菌株对西瓜植物的防病效果十分明显。接种西瓜病原菌后,未接种促生菌株的西瓜植株生长受到明显的抑制,茎叶鲜重和干重分别下降28.6%、26.3%,根鲜重和干重分别下降33.5%和27.0%。接种促生菌株后,植株由西瓜病原菌引起的生长抑制作用显著减轻,其中FRBN3的抑病效果最为明显,接种该菌株的西瓜植株茎鲜重、茎干重、根鲜重和根干重较接种病原菌处理的提高46.56%、36.36%、52.65%、37.72%。
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