浆细胞瘤多样异位基因1在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

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卵巢癌是妇科肿瘤死亡最主要的原因,其致死率占据世界上恶性肿瘤的第五位。全球每年都有超过200000例新诊断病例,每年超过100000人死亡。在中国,过去的10年里卵巢癌的发病率有所增加,在2015年,新患病例达到52100例,与癌症相关的死亡数高达22500例。因为卵巢在盆腔深部,病变在早期时不容易被察觉,可一旦病情发展到了晚期,又没有太明显的治疗效果,所以卵巢癌已经成为了妇女健康的一大威胁,死亡率居高不下。目前临床上针对卵巢癌的主要治疗方法是手术,辅助以化疗。早期行全面分期手术;晚期则行肿瘤细胞减灭术,术后给予以铂类为基础的联合化疗。国际妇科和产科联合会(FIGO)统计了卵巢癌各个分期的5年生存率,Ⅲa期为46.7%,Ⅳ期为18.4%,Ⅰ期超过超过80%。卵巢癌的发生、发展是多基因参与、多阶段、多步骤的演变过程。进一步研究与卵巢癌有关的潜在致病基因,将可能深入了解卵巢癌的发生发展机制,对于寻找新的治疗靶点和进行个体化治疗具有重要的临床意义。  长链非编码RNA(long non-coding RNA,IncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的RNA,又因缺乏开放阅读框,故无蛋白编码的功能。近年来许多研究发现,IncRNA能够在多个水平调控基因的表达,比如表观遗传、转录水平和转录后水平的翻译,参与了基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译等调控过程。LncRNA在细胞的生长发育和疾病的发生发展过程中具有重要的生物学功能,包括心血管疾病、人们谈之色变的癌症以及神经系统疾病阿尔茨海默病。  浆细胞瘤多样异位基因1(plasmacytoma variant translocation gene1,PVT1)是一类特异性的长链非编码RNA。研究提示,PVTI可作为特异性基因在多种肿瘤中发挥重要作用,比如:胃癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌等,参与了肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭转移、干细胞分化及耐药等生物学功能。但是IncRNA PVT1在卵巢癌中的分子机制尚未被阐明。  本文主要从以下几个部分展开论述:  第一部分 长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达以及与临床病理特征间的关系  目的:  探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达,并探讨IncRNA PVT1与卵巢癌临床病理特征之间的关系。  方法:  1.通过实时荧光定量PCR技术检测32例卵巢癌患者癌组织及正常卵巢组织中PVTI的表达水平;  2.采用SPSS17.0统计学软件,数据以(x)±s表示,两组间比较采用t检验。  结果:  1.相比于正常的卵巢组织,PVTI在卵巢癌组织中的表达水平显著升高;  2.FIGO分期、组织学分级越高,PVT1在卵巢癌组织表达水平越高。  结论:  PVT1在卵巢癌组织中的表达水平比正常卵巢组织显著增高,且PVT1的表达水平与卵巢癌患者组织学分级、FIGO分期相关,提示PVT1在卵巢癌中发挥作用。  第二部分 长链非编码RNA PVT1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响  目的:  探讨PVT1在卵巢癌SKOV3细胞中增殖、侵袭及迁移等恶性生物学行为。  方法:  1.采用PVTI小干扰技术,使用转染试剂Lipofectamine2000和siRNA-PVTI对SKOV3细胞进行PVTI敲除(siPVTI-1,siPVTl-2,si-NC),实时荧光定量PCR检测各组细胞中PVTI的表达水平;  2.对PVTI敲除组细胞和对照组细胞(转染对照组si-NC,空白对照组)进行CCK8染色检测细胞的增殖能力、细胞划痕实验检测细胞的迁移能力、Transwell实验检测细胞的侵袭迁移能力。  结果:  1.转染si-PVTl-1、si-PVTI-236h后,PVTI表达水平较si-NC和空白对照组明显降低,且siPVTI-1的转染效率优于siPVTl-2,后续应用siPVTl-1干扰的SKOV3细胞进行实验:  2.敲除PVT1的表达后,SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力同时受到抑制。  结论:  PVTI在卵巢癌中高表达,可被视为是卵巢癌的致癌基因,抑制PVTI表达,卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显下降,为卵巢癌的诊断和靶向治疗提供新的理论依据。
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