一、电离辐射对体内free UB的表达水平的影响【目的】研究电离辐射诱导机体体内free UB的表达变化。【方法】应用ELISA法定量检测X射线照射后C57小鼠血清中free UB的含量,γ射线照射后恒河猴血清中free UB的含量,食管癌病人放疗前、放疗中、放疗后血清中free UB的含量变化;Western blot法检测小鼠不同辐射敏感组织中free UB蛋白的表达;RT-PCR法检测小鼠不同辐射敏感组织中free UB编码基因UBB的m RNA水平。【结果】与非照射组相比,照射后24、48 h,小鼠血清中free UB浓度随照射剂量的增加而增加(P<0.01);5、10 Gy X射线照射后,小鼠血清中free UB浓度随照射后时间的延长而增加(P<0.01)。与非照射组相比,恒河猴血清中free UB浓度在照射后1、3、7、15 d明显增加(P<0.05),照射后21 d恢复正常值。与放疗前相比,肿瘤病人放疗中血清中free UB的表达量无明显变化(P>0.05),然而,放疗后血清中free UB的表达量明显增加(P<0.05)。与照射前相比,7 Gy X射线照射后1、7 d,小鼠小肠组织中free UB表达量明显增加(P<0.05);7 Gy X射线照射后1、7、14 d,小鼠脾脏组织中free UB表达量明显增加(P<0.05);然而,7 Gy X射线照射后1、7、14d,小鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏组织中free UB表达量无明显变化。与非照射组相比,X射线照射后24 h,free UB编码基因UBB的m RNA表达水平均明显增加(P<0.01);而心脏组织中free UB编码基因UBB的m RNA表达水平均无明显改变(P>0.05)。【结论】通过诱导辐射敏感组织中free UB蛋白表达水平增加,电离辐射能够增加机体血清中free UB的表达量;free UB水平可能与组织的辐射敏感性和组织受损程度有关。二、Free UB对小鼠辐射损伤的防护作用【目的】探讨free UB对小鼠辐射损伤的防护功效。【方法】观察记录5、7、9 Gy全身照射后free UB预处理组C57BL/6小鼠及PBS预处理组小鼠的生存,绘制生存曲线。通过连续观察free UB对X射线辐射后小鼠白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的影响,胸骨骨髓病理形态学的影响,以及free UB对X射线照射后小鼠骨髓CFU-GM的影响,探讨free UB对造血系统的辐射防护作用。通过观察free UB对X射线照射后小鼠肠道一般情况的影响,小肠病理形态学的影响,以及Ki-67+小肠隐窝细胞数的影响,探讨free UB对肠道系统的辐射防护作用。通过观察free UB对X射线辐射后小鼠脾脏病理形态学的影响,探讨free UB对免疫系统的辐射防护作用。【结果】Free UB提高了5、7、9 Gy X射线照射后小鼠的存活率。Free UB促进了外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的恢复,减轻了胸骨骨髓组织的辐射损伤,减轻了辐射对造血祖细胞(HPC)的功能抑制,对造血系统的辐射损伤具有保护作用。Free UB减轻了辐射后小鼠腹腔内肠道的水肿程度,减轻了辐射后小鼠空肠绒毛、隐窝的损伤,提高了Ki-67+小肠隐窝细胞数目,对肠道系统的辐射损伤具有保护作用。Free UB减轻了辐射后小鼠脾脏淋巴细胞的损伤,对免疫系统的辐射损伤具有保护作用。【结论】Free UB对小鼠的造血系统、肠道系统、免疫系统具有辐射防护作用。三、Free UB对小鼠辐射损伤防护作用的机制研究【目的】探讨free UB对小鼠辐射损伤防护作用的机制研究。【方法】运用小鼠全基因表达谱芯片观察free UB对辐射小鼠小肠基因表达谱的影响,运用免疫组化以及Western Blot法观察free UB对辐射后小鼠小肠组织中YAP、Akt、p-Akt表达量的影响,初步阐明free UB对辐射损伤防护作用的分子机理。【结果】表达谱芯片表明free UB可影响多个受体介导的信号通路,其中包括差异显著的Hippo信号通路。Free UB可增加辐射后小鼠小肠组织中YAP、Akt、p-Akt的表达量。【结论】Free UB对小鼠的造血系统、肠道系统、免疫系统具有辐射防护作用,机理可能是通过诱导机体YAP的过表达,从而活化PI3K/Akt通路,上调p-Akt。