原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，具有起病隐匿、病程短，进展快、恶性程度高、疗效差、患者生存期短等特点，严重危害人们的身心健康。多年来我国医务工作者在应用中医药治疗肝癌方面，做了大量的研究与临床实践，总结了多种行之有效的治则治法。马红丸是广州市中医医院研制的治疗原发性肝癌的纯中药复方制剂，鉴此，本课题拟采用二乙基亚硝胺(diethlintrosamine，DEN)诱发大鼠肝癌模型，用马红丸治疗肝癌的疗效探讨常用中医不同治法的作用机制及差异，为临床提供较为详细的实验资料。 本研究是通过多种实验方法，研究马红丸对大鼠肝癌组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和基质金属蛋白酶一9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)表达的影响，探讨纯中药复方制剂马红丸对肝癌血管生成的影响。 本研究采用SPF级SD(spraque dawley)大鼠150只，雄性，随机取20只SD大鼠用于空白对照组，按常规方法饲养，其余130只SD大鼠用于建立二乙基亚硝胺大鼠肝细胞癌模型，造模大鼠每天自由饮用1g/mL浓度的DEN水溶液，维持DEN摄入量约12.5mg/kg.d，饮用水隔日更换，连续16周后改用正常饮用水喂养至20周末实验结束，同时给予全价营养无菌饲料饲喂。于造模第14周末，随机取造模大鼠15只，空白对照组大鼠8只，乙醚麻醉处死，取肝脏组织，常规HE染色进行病理组织观察，检查肝癌模型成模情况。余下的造模大鼠自第15周起给予药物治疗，将造模大鼠随机平均分为模型组、马红丸高剂量组、马红丸低剂量组、环磷酰胺组(阳性药物组1)、呋喃氟脲嘧啶(阳性药物组2)共5组，分别按体重给予药物灌胃给药，空白对照组和模型组按体重给予蒸馏水灌胃。每天观察大鼠精神、饮食、排便情况，每周称大鼠体重、24h饲料量及饮水量一次，并根据体重调整给药量，连续给药6周后实验结束。实验结束前一天全部动物禁食10小时，乙醚麻醉，自眼眶后静脉丛取血约4mL离心，分离血清置-80℃超低温冰箱保存，待用。处死动物后取出肝脏组织和肝内肿瘤称重，部分肝组织以10％中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，按4μm制作切片，用于常规HE染色病理组织观察及免疫组化染色。部分肝组织置液氮冻存备用。采用免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF和MMP-9的表达；逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测肿瘤组织中VEGFmRNA和MMP-9 mRNA的表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤组织上清液中VEGF和MMF-9蛋白的表达。 研究结果表明肝癌模型制作成功，模型组基本都形成了结节型肝细胞癌，且出血坏死严重。马红丸高、低剂量组均有部分肝组织内未见癌肿，已形成癌肿的肝组织内可见癌结节数量、大小明显较模型组少，出血坏死情况较轻，伴有炎性细胞浸润。表明马红丸对肝癌的发展有一定的抑制，其效果优于环磷酰胺组、呋喃氟脲嘧啶组。通过用免疫组化法、ELISA、RT—PCR技术检测肿瘤组织中VEGF和MMF-9的表达，结果表明，马红丸高、低剂量的中药治疗在一定程度上降低MMP-9和VEGF的表达，同时抑制VEGF蛋白的生成，减慢肿瘤细胞新生血管的生成，从而减缓肿瘤的侵袭和转移。 本研究表明马红丸中药复方对大鼠肝癌动物模型血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMF-9)表达有一定的影响，对抑制肝癌的侵袭和转移的有一定的影响。