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背景:树突状细胞(dendritic cells,DCs)是一种诱导T细胞活化和增殖反应的重要细胞。结节性硬化物1(tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)上游重要的负调节因子。最近的研究突出Tsc1在树突状细胞的发育方面的作用,但是在体内Tsc1是否直接调节或者怎么调节成熟树突状细胞对T细胞活化增殖作用的机制还不是很明晰。目的:本实验主要研究稳态下成熟树突状细胞表达的Tsc1对T细胞活化增殖作用的机制。方法:(1)Tsc1f/f小鼠和CD11cCre转基因小鼠杂交来建立特异性敲除树突状细胞中Tsc1的小鼠(CD11cCreTsc1f/f)系统,普通PCR和westernblot分别在基因水平和蛋白水平检测Tsc1基因是否敲除。(2)流式细胞术检测T细胞的活化、Ki67表达和细胞因子的表达。(3)应用体外树突状细胞-初始T细胞共培养系统,流式细胞术检测阻断或不阻断Nrp1时T细胞增殖;流式细胞术检测树突状细胞中Nrp1的表达。(4)流式细胞仪检测树突状细胞主要信号通路的激活和变化;流式细胞术检测树突状细胞胞内S6K磷酸化水平、Nrp1表达水平和T细胞的活化比例。结果:(1)成功建立了Tsc 基因敲除小鼠,Tsc1在基因水平和蛋白水平均被敲除。(2)Tc1基因敲除后与对照组相比,脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞活化增加,脾脏中初始CD4+T细胞和CD8+T细胞的细胞数随年龄增加而减少,T细胞细胞增殖增加和细胞因子表达升高。(3)Tc1基因敲除后与对照组相比,树突状细胞诱导的初始T细胞增殖是增加的,树突状细胞中表达大量的Nrp1,阻断Nrp1,可以部分抑制由Tsc1敲除的树突状细胞启动的初始CD4+T细胞的活化。(4)Tc1基因敲除后与对照组相比,S6K和PPAR-y的活化明显增加;在CD11cCreTsc1f/f Raptorf/+小鼠树突状细胞中Nrp1表达及T细胞活化的表型被极大地挽救,mTORC1的过度表达被降低;抑制PPAR-γ,可以使Tsc1敲除的树突状细胞中Nrp1的表达降低。结论:(1)成功建立了Tsc 基因敲除小鼠CD11cCreTsc1f/f;(2)树突状细胞的Tsc1基因可以防止体内自发的T细胞活化;(3)在树突状细胞中Tsc1通过抑制Nrp1表达来阻止初始T细胞的增殖;(4)Tsc1通过阻止mTORC1-PPAR-γ信号通路来抑制Nrp1的表达。目的探索转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)通过调节树突状细胞(dendriticcells,DCs)的功能从而抑制CD4+T细胞增殖活化的可能作用机制。方法应用CD11c+免疫磁珠分选小鼠脾脏DCs,并检测其纯度。TGF-β处理DCs后,进行基因芯片检测。实时定量PCR验证基因芯片结果。DCs经TGF-β处理后和CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测CD4+T细胞的活化和增殖。结果CD11c磁珠分选DCs纯度可以达到95%。TGF-β处理DCs后,抑制DCs表面CD53、CD69、CD33、CD74、CD93 分子的表达;抑制趋化因子 Cc13、Ccl5、Ccl9、Cc16、Cc117、Cxcl10、Cc122、Cc14、Ccr7、Cc12、Cxc19、Ccr7 的表达;抑制 IL-2ra、IL12-rb2、IL-15ra、IL-1b、IL-15炎性细胞因子及其受体的表达;抑制CD4+T细胞的增殖和活化。结论TGF-β可以抑制DCs部分重要的表面CD分子、趋化因子及其受体、细胞因子及其受体的表达,最终抑制CD4+T细胞的促活化和增殖。