本研究利用现代分子生物学实验技术,克隆了牛脂联素基因,构建了脂联素毕赤酵母表达载体,实现了毕赤酵母真核表达;同时证明表达的脂联素具有较好的生物学活性。在此基础上,应用荧光定量RT-PCR方法,通过体外肝细胞原代培养实验及动物实验,研究了脂联素对肝糖异生关键酶PEPCK mRNA和PC mRNA表达水平和酶活性的调控作用,为揭示围产期奶牛能量代谢负平衡的发生机制和从细胞因子水平寻找防治该类疾病的新途径奠定了实验基础。脂联素基因的克隆与序列分析表明:所获得的669bp目的基因与GenBank中牛脂联素基因的编码序列相比,同源性为100%,证明所克隆的基因是正确的。毕赤酵母表达实验表明:脂联素基因正确整合到了受体菌GS115的基因组上,成功实现了牛重组脂联素的分泌表达。纯化的蛋白经糖尿病小鼠模型实验检测具有较好的生物学活性。荧光定量RT-PCR方法建立实验表明,建立的荧光定量RT-PCR方法准确性好、灵敏度高、稳定性强,可应用于PC、PECPK mRNA表达水平的定量分析。肝细胞分离培养实验结果显示,ADPN对肝细胞PEPCK mRNA表达具有抑制作用,随剂量增加抑制作用增强。随着ADPN浓度的升高,与对照组比较,肝细胞PEPCK活性明显降低,且随脂联素浓度升高其作用越明显(P<0.05);PC活性也呈下降趋势,差异不显著。动物实验表明ADPN对PEPCK mRNA的表达及酶活性具有显著的抑制作用,对PC mRNA的表达及酶活性的抑制作用不明显。ADPN通过对PEPCK、PC活性的抑制降低血糖。