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罗非鱼作为世界第二大淡水养殖鱼类,具有较高的经济价值。近年来,由罗非鱼湖病毒（Tilapia lake virus,TiLV）感染引起的罗非鱼湖病毒病（Tilapia lake virus disease,TiLVD）给罗非鱼产业造成了巨大威胁。TiLV具有高度传染性,能感染养殖及野生罗非鱼,使其患病并导致大量死亡。至今为止,TiLV的致病机理尚不明确,亦缺乏有效的防治措施。敏感细胞系是病毒性疾病病原学基础研究和诊断技术、疫苗等防控产品开发的基础材料和关键工具。鱼类终身生活在含有各种病原的水环境中,它的皮肤等粘膜免疫相关的组织器官构成了免疫的第一道防线。多聚免疫球蛋白受体（polymeric immunoglobulin receptor,pIgR）是黏膜免疫过程中的重要因子,可以通过胞吞作用将多聚免疫球蛋白（polymeric immunoglobulin,p Ig）从上皮细胞基底外侧表面转运到细胞的顶端表面,保护粘膜组织免受病原体入侵,并维持粘膜免疫系统的内环境稳定。也有相关报道表明pIgR可能会被病原劫持,促进病原自身的感染。本研究对TiLV的敏感细胞系进行了筛选,同时研究了罗非鱼pIgR的生物学特性及其对TiLV增殖的影响。旨在为TiLV防控产品的开发和罗非鱼抗病毒免疫机制的研究奠定基础。研究结果如下:1.TiLV敏感细胞系的筛选首先优化病毒接种浓度,以最佳接种浓度同时感染10种鱼类细胞系,观察细胞病变效应（Cytopathic effect,CPE）,RT-q PCR方法检测TiLV在10种细胞系中的增殖量,并用间接免疫荧光验证病毒在细胞中的增殖情况。结果表明,Ti L V感染细胞的最佳浓度为1.0×10~5copies/μL,10种鱼类细胞在感染该毒株后均出现了明显的CPE;定量结果显示,TiLV在10种鱼类细胞均能增殖,其中在Ti B中增殖量最高。共聚焦免疫荧光结果显示,在10种细胞中均可看到红色荧光,与荧光定量检测结果相吻合。随机选择三种TiLV感染细胞进电镜观察,均可看到直径70 nm-110 nm的病毒颗粒。该研究结果对今后TiLV的基础研究和防控产品开发具有重要意义。2.罗非鱼pIgR分子特性以及表达模式的研究为明确罗非鱼pIgR基因（OnpIgR）的序列和结构特征,本研究首先通过R T-PCR扩增出了罗非鱼pIgR完整的开放阅读框ORF,并对其进行分析;然后测定pIgR基因在正常罗非鱼各组织中的分布,同时分析了感染TiLV后其脾、肾及皮肤组织中pIgR表达的变化。结果表明,PCR扩增获得了完整的罗非鱼pIgR ORF序列,长度为1023bp,系统发育树显示,pIgR基因分为硬骨鱼类、两栖类与鸟类、哺乳类三个亚群;罗非鱼pIgR与同属于鲈形目的大口黑鲈以及斜带石斑鱼的pIgR聚为一支;pIgR在健康罗非鱼各个组织器官中均可表达,脾脏中的表达量最高、其次是脾脏以及皮肤;感染TiLV后,罗非鱼皮肤、脾脏以及肾脏中pIgR均呈先上升后下降的趋势,并且在感染后的24 h时皮肤中pIgR表达量达到峰值,而脾脏与肾脏中则是在感染后的48 h出现峰值。3.罗非鱼pIgR过表达对TiLV增殖的影响为探究OnpIgR对TiLV增殖的影响,本研究首先构建了pIgR过表达质粒,将构建的过表达载体转染进Ti B后,感染TiLV,并于感染后的48h以及72h收集样品,在病毒m RNA以及蛋白水平进行了检测,初步探究了pIgR对于TiLV增殖的影响。酶切鉴定显示pIgR过表达质粒构建成功,Western Blot验证转染p EGFP-pIgR在55 k Da～70 k Da的位置出现与预期大小相符的融合蛋白条带,将重组质粒和空载质粒转染Ti B细胞24 h后,在荧光显微镜下均能够看到较强的绿色荧光,以上结果表明重组真核表达载体能够在体外正常表达目的蛋白;在T i B细胞中过表达pIgR后感染TiLV,发现TiLV的S8和S10节段m RNA相对表达量显著增多,TiLV拷贝数也显著增多,利用TiLV-S8单抗WB以及IFA检测发现过表达组TiLV的蛋白表达量以及红色荧光出现了增多。以上结果初步表明罗非鱼pIgR对TiLV的增殖具有促进作用。