研究目的血型是人类血液的主要特征之一,表达了产生抗原-抗体系统的遗传特征。与临床相关的主要是ABO、Rh、Kell、Kidd、MNSs等十余个血型系统,其中以ABO、Rh血型系统最为重要。ABO血型与部分疾病的发生具有关联性,不仅与输血有密切的关系,也与器官移植、溶血性疾病、法医鉴定和人类学有关。ABO血型系统有A、B、H抗原,出现的表型有A、B、O、 AB血型,该系统最常见亚型出现在含A抗原的人群中,B亚型不多见。A型个体大多数属于A1型,少数属于A2型,及更少频率的A3、Ax及Am等亚型。在这些稀少的A亚型中不仅具有很强的抗B抗体,还会产生抗原性不同的抗A抗体,这就给临床血型的鉴定和配血带来困难,从而影响临床输血的安全。目前国内对A亚型的概率分布报道的不多,且南京地区未见关于该方面的报道。本研究拟通过较大样本量对南京地区汉族人群A血型亚型的基因分析,获取本地区人群A血型基因多态性的分布资料,为中国汉族人群A血型亚型多样性提供数据,丰富人类血型学内容,为进化、迁徙的研究提供依据；为血清学检测存在疑问的标本提供其基因分子的佐证；根据亚型调查的结果,考虑建立ABO亚型资料库的可行性,确保临床输血安全。实验方法随机选择2013年10月-2014年6月来江苏省血液中心符合《献血者健康检查要求》的无偿献血者ABO血型定型为A型和AB型的EDTA.K.2抗凝全血标本,其中A型标本7839人份、AB型标本2173人份,共计10012人份。采用微板法进行A亚型的血清学筛查。收集弱凝集和不凝集标本的白细胞膜层,置-20℃冰箱低温保存。采用原平皓(天津)生物技术有限公司商用试剂盒按照说明书提取样本基因组DNA,对ABO血型基因的第6-7外显子进行测序,采用SeqScapeV2.5软件进行数据分析,将A101序列作为标准序列,测定序列与标准序列比对后,获取ABO基因6-7外显子多态性,将多态性情况与ABO血型突变数据库序列比较,从而确定ABO血型序列及基因型。结果1、南京地区A血型亚型在A型人群中的比例约为0.31%,其基因以A201亚型为主,而在AB型人群中的比例约为1.80%,其基因型以A205亚型为主；2、在2169名AB型人群中检出1例CisAB06和1例B(A)02,各占AB型的0.046%(1/2169),据此推算出CisAB亚型和B(A)在南京地区汉族人群的比例分别为4.6/10万(0.0046%),合计为9.2/10万(0.0092%),明显高于原先血清学报道的1/17-58万的比例；3、发现1例A205/001基因型出现nt806位杂合新突变的样本,经克隆测序证实突变位于0单倍型基因上,该新等位基因第7外显子序列已经提交Genbank,序列号为KP341759;4、A亚型在A型人群中血清学表型结果与分子生物学结果无显著差异,而在AB型人群中血清学表型结果与分子生物学结果有显著差异(p<0.05)。判断A2亚型,必须将血清学试验与分子生物学技术相结合。结论本研究首次系统获取了南京地区汉族人群ABO血型基因多态性的分布资料,丰富了人类血型学的内容；建立的ABO血型系统基因测序方法将进一步完善本实验室的血型诊断技术；初步建立的南京地区A亚型血型基因库,可以为南京地区的临床疑难配血以及疑难血型鉴定提供服务,并可以接收各地送检的疑难标本,为临床提供疑难稀有血型配合性技术服务,提高配合成功率,保证临床输血安全。