K562细胞诱导分化早期的mRNA差别显示及未知基因KS1克隆的实验研究

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随着分子生物学的发展和人类基因组计划的深入研究,各种克隆和分离技术相继发明和改善.DD-PCR又称差别显示反转录PCR(DD-RT-PCR)或mRNA差别显示法,是LiangP.等1992 年建立的一种以PCR为基础的,能有效鉴别并克隆一对组织或细胞间差别表达基因的方法. 几年来,该方法已广泛应用于分子生物学研究的各个领域,在对多种疾病的研究中,研究者通过这一方法已分离出许多疾病相关基因和新基因.该实验拟应用DD-PCR分离出苦参碱作用K562的早期差异表达cDNA片段并运用RACE技术钓取克隆相关基因以作进一步功能研究.为了明确未知基因KS1在K562细胞中的表达以及是否受不同浓度苦参碱作用和作用时间的影响, 该实验将前面所获得的KS1基因的cDNA片段制成探针,经过斑点杂交和Northern Blot分析,均未得到阳性杂交信号.最后利用DD-PCR时分离此片段的锚定引物和随机引物进行逆转录PCR(RT-PCR),再行斑点杂交检测RT-PCR产物,获得了杂交信号.此结果表明KS1基因为K562细胞中的低丰度表达基因.
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