论文部分内容阅读
鸡马立克病(Marek’s Disease,MD)是由鸡马立克病病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)引起的一种常见的具有高度传染性的淋巴组织增生性疾病。目前主要靠疫苗免疫预防,但是近年来,鸡群虽然接种了鸡马立克病疫苗CVI988/Rispens株或814株,但是马立克病仍有发生。研究发现发病鸡群常伴随鸡传染性贫血病毒(Chicken Infections Anemia Virus,CIAV)、禽网状内皮组织增殖症病毒(Reticuloendosiliosis Virus,REV)等免疫抑制病毒感染的现象,免疫抑制病能导致机体生长迟缓等影响,从而给家禽养殖业造成巨大的经济损失。其中CIAV感染对MDV爆发的影响越来越引起人们的重视,CIAV主要引起鸡的再生障碍贫血以及免疫抑制,可以水平传播。早在19世纪80年代就发现MD发病鸡中感染CIAV,并且CIAV可以在鸡MDV肿瘤细胞系MDCC-MSB1细胞中传代并引起细胞病变。本研究利用SPF鸡人工模拟CIAV感染对MD疫苗免疫抑制的作用,从不同的角度揭示了CIAV对MD疫苗的免疫效果的影响,为鸡马立克病的预防提供科学的理论依据。1.感染CIAV SD15株显著降低马立克病疫苗对马立克病病毒的免疫保护力将200只1日龄的SPF鸡随机分为5组,饲养在动物房的负压空气过滤隔离罩内。1日龄时,第1、2、3、4组每组鸡均以正常剂量腹腔注射MDV商品化疫苗CVI988/Rispens,同时,第2和3组每组以400 EID50/只的剂量口服CIAV SD15株。5日龄第3、4、5组每组鸡均以2000 PFU/只的剂量腹腔注射MDV超强毒GX0101。整个试验为期90天,每天观察并记录鸡的病变及死亡情况。结果显示马立克病疫苗CVI988/Ripens能够对在5日龄感染2000 PFU GX0101的SPF鸡提供较好的免疫保护,CVI988/Rispens能够降低GX0101感染鸡的致病性,但是CIAV的感染增加了CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒鸡的死亡率,第1、2、3、4、5组鸡的死亡率分别为0%、14.3%、42.9%、5.71%以及31.4%。CIAV的感染降低了MD疫苗的免疫效果,增强MDV野毒的致病性。MDV GX0101株攻毒后第0、5、9、16、23、30、37、44天称量各组鸡的体重。10日龄时免疫禽流感、新城疫灭活疫苗,免疫后的第21、28、35天检测在鸡体诱导产生的抗体水平,在GX0101攻毒后第9天和第16天每组随机选取五只鸡进行剖检,采集脾脏、法氏囊和胸腺测量免疫器官指数。结果表明,相比CVI988/Rispens免疫组,CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组,不同时间体重差异不显著(P>0.05),而CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV攻毒组均显著降低(P<0.05)。CIAV的感染显著抑制鸡体AIV-H9、NDV灭活疫苗抗体的产生,相比CVI988/Rispens免疫GX0101攻毒组,CVI988/Rispens免疫和GX0101、CIAV感染组抗体水平均显著降低(P<0.05),CIAV感染诱发强烈的免疫抑制,引起胸腺、法氏囊的萎缩以及脾脏的肿大。2.感染CIAV SD15株显著降低马立克病疫苗对马立克病病毒复制的抑制作用MDV超强毒GX0101是从中国分离的含有REV-LTR片段的重组MDV,第3、4、5组在GX0101攻毒后5、9、16、23、30天,每组各随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取DNA,利用本实验室建立的荧光定量PCR方法检测GX0101的拷贝数。结果显示CVI988/Ripens能够抑制GX0101在鸡体内的复制水平,GX0101感染组在攻毒后第23天淋巴细胞中GX0101病毒拷贝数达到高峰,CVI988/Rispens免疫GX0101感染组攻毒后第16天淋巴细胞中GX0101拷贝数达到高峰,CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV感染组攻毒后淋巴细胞GX0101拷贝数持续增加至30天。在感染后不同时间检测GX0101拷贝数,GX0101感染组均显著高于CVI988/Rispens免疫GX0101、CIAV感染组(P<0.05),高于CVI988/Rispens免疫GX0101感染组。第3、4组在GX0101攻毒后0、5、9、16、23天,每组随机选取6只鸡采集抗凝血分离淋巴细胞提取RNA,针对性的选择了参与炎症反应的IL-6,具有免疫调节抑制作用的IL-18,具有抗病毒活性的IFN-γ,从细胞转录水平揭示感染CIAV影响MD疫苗CVI988/Rispens对MDV的免疫效果。IL-6,IL-18和IFN-γ的mRNA表达在GX0101攻毒5天后显著增加,然后再降低。MD疫苗的保护效力下降可能与后期的IL-18和IFN-γmRNA水平降低相关。当与CIAV感染时,对鸡IL-6的缺乏也可能导致MDV滴度增加和对MD的疫苗免疫性降低。CIAV感染明显降低了MD疫苗的免疫效果,增强MDV野毒的复制水平。CIAV或者其它免疫抑制病的感染可能是近年来中国MD频发的一个原因。