木栖海洋真菌MF1221次生代谢产物的分离纯化及抑菌活性研究

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人类寻找新药主要有三种途径:化学合成、生物工程和天然活性物质的筛选。天然药物作为三大主要途径之一,其活性物质主要来源于植物、动物和微生物,而微生物次生代谢产物已经成为及其重要的来源。海洋活性物质,以其种类丰富多这样,结构新颖多变,活性好,已经多有应用。  本研究以胶州湾海洋漂浮木中分离的一株真菌MF1221为研究对象。以PCR技术扩增其基因序列,对其ITS-5.8S rDNA进行基因测序,将测定的测定的基因序列提交Genbank的Blast进行序列比对,并采用Clustal和Mega软件对木栖海洋真菌MF1221及其相关菌株的相关基因序列进行系统进化树的构建,发现与粉红单端孢KP317992相似度为99.9%。结合其形态特征及系统进化树的构建,鉴定木栖海洋真菌为真菌界、半知菌门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科、聚端孢属的粉红单端孢。命名为Trichothecium roseum MF1221。  以OSMAC策略对菌株Trichothecium roseum MF1221进行发酵培养基的筛选,以白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、柑橘炭疽病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦纹枯病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌为供试真菌,并结合HPLC-DAD的手段检测其活性物质分布。结果发现其PDB培养基和大米培养基的活性最好,物质最丰富,所以选择此两种培养基进行规模发酵。  综合运用硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析和制备薄层层析等方法,对木栖海洋真菌Trichothecium roseum MF1221发酵产物乙酸乙酯萃取部分进行分离纯化。得到24个单体化合物。通过核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等现代技术和文献比对的方法,对已得到的化合物进行结构鉴定。结果表明:24个化合物中苯环衍生物5个、甾醇类2个,生物碱类6个,聚酮类2个、单端孢烯素类4个、环肽类2个、倍半萜类2个、异黄酮类1个。  对鉴定得到的单体化合物进行抑菌和卤虫致死活性的实验,结果表明单体化和物普遍具有抑菌和杀虫活性,其中单端孢烯素类化合物活性表现普遍较好。
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